胆红素提取工艺规程
胆红素是从猪胆汁中提取的胆色素,为橙色粉末。易溶于氯仿(即三氯甲烷CHC13)。不溶于水和乙醚,在酒精中溶解得很少。其盐类则溶于水。在氯仿中结晶的纯品,为橙色单斜片状。它易氧化成胆绿素,无特殊气味。胆红素主要用途是供合成珍贵中药牛黄及作试剂用。目前各地生化制药厂及外贸公司收购纯品价格是每公斤在18000-20000元
提取胆红素主要需要以下设备和工具:① 火山式夹层倾斜锅(可用普通铝锅代);② 大分液漏斗(分离抽提液用);③ 电动搅拌器(酸化用、可用人工搅拌代替);④ 水浴箱(回收氯仿。浓缩和水洗时用、一般容器可代);⑤ 向瓷缸(装石灰水和胆汁用);⑥ 搪瓷桶;⑦ 球瓶(容量为10000~15000毫升,回收氯仿用;⑧ 玻璃冷凝管(规格为100厘米长,回收氯仿用);⑨ 布氏漏斗(可用普通漏斗内加二层左冶"的确凉”滤布代,精制抽滤时用);⑩ 玻璃瓶及其他容器等;① 台式天平秤(克秤可代用);⑩ 比重计。
提取胆红素的主要原材料、辅助材料及规格是:① 猪胆:新鲜冰冻,不得腐败变质:② 石灰:工业纯;③ 盐酸:工业纯;④氯仿:工业纯;⑤ 酒精:85%以上浓度;⑥ 无水乙醇(即无水酒精、化学纯);⑦ 乙醚;化学纯;⑧ 偏重亚硫酸钠(抗氧剂);⑨ 精密酸碱测试纸(PH1-5)。
提取工艺 过程:
一、原料处理:取新鲜猪胆(或冻猪胆,解冻后用),称重后。置于竹箕内,剪破胆皮(或放入绞肉机内绞破胆皮),滤去胆皮,剩下胆汁,用单层纱布:过滤一次,除去油脂和杂物、再称其重量。移入可倾锅内、准备用以制备钙益。
二、制备钙盐:取优质生石灰,加入适量自来水,制成乳白色的饱和石灰水溶液(比重1·02),再按胆汁重量与石灰水重场为1:0-7的比例,把石灰水慢慢加入胆汁中(注意;加的时候应保持石灰水的浓度均匀,边加边不断搅拌),同时逐步升高可倾锅内的蒸汽压力、使之逐步加热,加完后,再充分搅拌5-10分钟,并使汽压控制在每平方厘米1-1.5公斤之间,随着温度的不所开高(设限为90C)锅边便不断有橙色钙盐折出,浮于液面,并向中同聚集。待全部沸腾二分钟后(注流防止钙盐游出)立即减压降温,同时放出夹层中的余汽余水,销冷却后,用寸轻轻将大那分浮于液面的钙盐微出、用丙层纱布滤干,将锅中的母液移入缸内 f可供侧胆酸钠用),再将沉于锅底的少部分胆钙盐取出,合并上面的胆钙盐,一起滤干称重,待酸化
三、胆钙盐的酸化:称取一定量的胆钙盐,加入为胆钙盐重位80%的自来水,将钙盐搅拌捣烂成泥浆状,经30-40目筛过滤一次,落后在滤出的浆状液中加入0.03%(即100公斤胆汁加入30克)偏重亚硫酸纳抗氧剂,再置酸化桶中(糖瓷桶中加电动搅拌器),逐步加入工业纯盐酸进行酸化(边加边搅拌),。酸化到PH值达到I·5为止。(一般以150公斤猪胆或100公斤胆汁制备出8-10公斤胆钙盐为准,则酸化时间达4小时左右。用酸兰大约为4000毫升,如果目测。在气温较高的夏天,酸化液的色泽由橙色变为深草绿色时,即认为达到酸化要求)。酸化好了,静置半小时,然后用两层纱布过滤,将酸化液滤出(可用)以制取猪胆氧酸钠),保留沉淀物,称重,用于下一步酒精沉淀。
四,酒精沉淀:将上面酸化液中演出的沉淀物,加入8-10倍盐、浓度为30%以上的酒精,搅拌,捣碎沉浞物,然后移入瓶中,再加入0.03%的偏重亚硫酸钠抗氧剂,觉半均匀、静置12小时以上,让其分层沉淀(如在冬天,气温很低时,则酒精妥先预热,混合液置放过程中姿保温、否则,不易分层沉淀)。
五、水洗:用虹吸法吸去置放在瓶中上层深绿色溶液,将下层橙色沉淀物倒入2-3倍量的自来水中,加0.03%的抗氧剂,搅拌、置水浴中加温至500进行洗涤,约2小时,让其分层,橙色沉淀物则浮于水面、用虹吸法吸云下层清水(若温度太高而不易分层时,则直接加入氧仿,使橙色物溶于氯仿中,再将上层清水除去)。
六、氯仿抽提:把经水洗后的橙色沉淀物(时上面第五步中所得的沉淀物)装入分液漏斗中,加4-5倍最的氯仿及0.03%的抗氧剂,充分搅拌或振荡,使橙色沉淀物中的胆红素充分溶解于氧仿中,并置放4小时以上(冬天气温较低时,则需用40℃水浴保温),让其分层。然后将下层含胆红素的提取液分出(保存待用),.将留下的上层沉淀物倒入搪瓷酸化柏内,加盐酸并搅拌,调至PH值为1,然后重新装入分液漏斗中,进行第二次抽提。先往分液漏斗中加入1-2倍量的氯仿和0.03%的抗氧剂,搅拌振荡,置放1小时后如上法分出抽提液和沉淀物,沉淀物可贮存起来,待下批加2时,再并入抽提处理(因其中还含有少量可拍提的胆红索)。分出的抽提液则跟第一次的抽提液合并,准各下一步回收浓缩。
七,回收浓缩:将抽提液装入大球瓶中,加入0.03%抗氧剂,摇匀,接上冷藏管,于水浴中加热至沸腾,蒸发回收氯仿,直到氯仿从抽提液中蒸发回收完了为止。然后将球瓶中剩下的少量胆红素浓缩液,倒入小挖瓷桶内,加入4至5倍置、浓度在85%以土的酒精,置于水浴中(50℃为宜)散口蒸发半小时左右。
八、精制:村散口蒸发后的胆红素浓邹液,倒入布氏滑斗中(可用普通漏斗加二至三层白色“的确凉”布代巷)进行真空抽滤。第一次滤于后,再往布氏漏斗中加入经微热后的85%以上的酒精进行洗涤拍滤,如上法重复多次,洗至下面漏斗口流下的滤液无色为止。然后用无水酒精(浓度在98%以上)洗涤批扔三次(用 最大约为200-250毫升),倒出抽滤玻璃瓶中的洗涤液(可回收其所含的酒精)。最后用100-150毫升乙醚洗涤抽滤1-.2次(可将滤液中乙醚回收再用),滤干5至10分钟后,即可将布氏漏斗中的胆红素取出,称重,送入烘箱内干燥。
九、干燥和取样送检:精制后的湿胆红素盛玻璃蒸发器中,放进恒温烘箱(可自制)中进行脱水干燥(温度控制在50℃左右)干燥 数天后,取样送有关化验室(文生化制药厂的分析室)检验,含量仓格后,称其千重,即可包装于坚岗波璃容器中避光贮存,准备出售。
此法提取的胆红案,以胆重业计,得率为万分之二点五左右;以胆汁重量计,得率为万分之三点过左右。妥求胆红素含量不低于80%,色泽应为橙色。
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