【脑声常谈】动物实验云课堂：大小鼠五项社会记忆测试的实验方法及注意事项

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目的：本文旨在为研究者提供关于如何进行五次试验的社会记忆测试的信息。该测试用于评估社会记忆，并确定目标小鼠是否能够区分不同的新入侵者。

材料&研究对象

• 任何品系的小鼠。受试者需要训练，在测试前应适应测试环境和实验者。
  

• 去卵巢雌性（OEF）：每个受试者进行测试，每天进行5天的习惯化，没有以前的交互作用。OEF也可能需要处理。

• 不透明屏障(4)：马尼拉文件夹或纸，放置在相邻的家庭笼子之间。

• 透明塑料盖：放置在家庭笼子上。

• 摄像机在三脚架(2)：定位到每个捕捉两个笼子和角度。

• 软件：自动跟踪系统。

• 隐私盲：放置在设备周围，以消除外部房间线索。

• 带红色灯泡的站立灯(2)：远离设备，提供漫射光。

• 光计：用于测量仪器的照明度。

• 20%乙醇：在试验之间用于消除视觉和嗅觉残留。

测试设置

照明：整个设备的照明昏暗一致。

详细的标准操作程序

测试前适应：受试者在测试前被放置在测试室内至少1小时，以尽量减少测试过程中压力对行为的影响。

受试者培训：5天习惯于OEF以消除性行为。随机选择一个OEF放置在受试者家笼中24小时。每天使用新的OEF，重复总共5天的习惯化过程；表现出长期性行为的动物被排除在外，测试前1小时去除 OEF测试程序。

1.试验1：四个受试者的家庭笼子与不透明的分隔板放置在一起，分隔相邻的笼子。去掉笼子的顶部，并在笼子的顶部放置透明的塑料盖。记录开始，OEF被放置在受试者笼子中。有四个笼子，四个受试者可以同时运行。在1 min后，移除OEF，并停止记录。

2.试验2-4：试验2-4与试验1一样进行，使用相同的OEF，每个受试者的试验开始之间间隔10分钟。

3.试验5：试验与试验1-4一样进行，除了对每个受试者使用新的OEF。试验5后更换笼顶，并用20%乙醇清洁透明塑料盖。收集与每个OEF的交互（定义为嗅探和/或头部距离物体1厘米以内）以供分析。

具体操作流程

测试从10周龄开始，由于社交性测定的性别特异性设计，仅测试雄性小鼠。测试前1周将小鼠单独饲养。在进行社会记忆测试之前，将随机选择的单独饲养的 C57BL/6 卵巢切除雌性小鼠放入测试小鼠的笼子中，每天4小时，持续5-7天，以减少性行为。但通过添加第六次试验进行修改。将相同的、未见过的OEF小鼠放入测试小鼠的笼子中，进行四次1分钟的试验，试验间间隔10分钟。在第五次测试中，引入了新的OEF。在第六次试验中，重新引入试验1-4中的原始OEF作为对照。

使用5次社会记忆测试评估社交能力、社会认可、对社会新颖性的偏好和社会记忆。当在试验2-4中重新引入相同的OEF时以及当试验5中引入新的OEF时，社交时间改变意味着社交认知和记忆改变，对社交新奇事物的偏好改变。单居雄性小鼠面对三种类型的入侵者来评估刺激反应特异性。特别是，入侵者是（1）每次试验中相同的切除卵巢的雌性，（2）不同的切除卵巢的雌性，或（3）每次试验中群居的雄性入侵者。当同一雌性出现在四项试验中时，进行额外的“探测”试验，通过引入新的刺激雌性来评估行为变化的刺激特异性。

测试评估标准：所有试验均被录像并分析社交时间，使用混合效应线性回归模型来比较前四个过程中对动物之间的社交时间。Wilcoxen测试用于第五次和第六次测试的比较。使用详尽的评分策略记录社交和非社交行为的持续时间和频率，嗅觉探究行为包括肛门生殖器嗅探、身体和尾部嗅探以及头部嗅探，攻击性咬伤事件也要进行了评分。非社交行为包括行走、直立、自我梳理、静止警戒姿势和蜷缩坐姿。

注意事项

1. 用该范例对所有小鼠进行预测试，然后进行治疗和后测试；

2. 在任何行为前或行为后测试期间打架的雄性数据均从最终分析中剔除；

3. 综上，五项社会记忆测试评估中枢神经系统疾病啮齿动物模型中的认知能力，即识别新动物与熟悉动物的能力。在多次接触的过程中，啮齿类动物会习惯于入侵者，并且不再像完全陌生的入侵者那样对它们感兴趣。

参考文献

[1] Dluzen DE , Kreutzberg JD. 1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) disrupts social memory/recognition processes in the male mouse [J]. Brain research, 1993, 609(1-2): 98-102.

[2] Winslow JT , Camacho F. Cholinergic modulation of a decrement in social investigation following repeated contacts between mice [J]. Psychopharmacology, 1995, 121(2): 164-172.

[3] Ferguson JN , Young LJ , Hearn EF , et al. Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene [J]. Nature genetics, 2000, 25(3): 284-288.

[4] Faizi M , Bader PL , Saw N , et al. Thy1-hAPP(Lond/Swe+) mouse model of Alzheimer's disease displays broad behavioral deficits in sensorimotor, cognitive and social function [J]. Brain and behavior, 2012, 2(2): 142-154.

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