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细胞生物学与遗传学实验试剂

试剂

25%戊二醛(glutaraldehyde

BSABovine serum albumin,牛血清蛋白)

EDTA(乙二胺四酸,ethylene glycol tetraacetic acid)

EGTA(乙二醇双醚四乙酸,ethylene glycol tetraacetic acid)

Giemsa粉末

TritonX-100(C14H22O(C2H4O)n)

β甘油磷酸钠(β-Sodium glycerophosphate

氨水(Aqueous ammonia

巴比妥钠(佛拿罗纳,Barbital Sodium

冰醋酸(glacial acetic acid

丙三醇(甘油Glycerol

草酸铵(ammonium oxalate

次甲基蓝(亚甲基蓝、亚甲蓝、美蓝、品蓝,methylene blue

醋酸钙(乙酸钙,Calcium acetate

醋酸钠(乙酸钠,sodium acetateNaCH2COOH·3H2O

蛋白胨(peptone

碘(Iodine

碘化钾(Potassium iodide

多聚甲醛(ParaformaldehydePFA

番红(safranin

酚红(Phenol Red

甘油(Glycerol

肝素(heparin)

固绿(快绿FCFFast green FCF

过氧化氢(30%)hydrogen peroxide

甲苯胺蓝ToluidineBlue O

甲醇(木醇、木精、羟基甲烷,Methanol

甲基蓝(油脂蓝、棉蓝、溶剂蓝8B、酸性蓝93、品蓝,Methyl blue

甲基绿(Methyl Green

甲醛(蚁醛,Formaldehyde

碱性品红(玫瑰苯胺、盐基品红,basic fuchsin

结晶紫(crystal violet,龙胆紫gentian violet,甲基紫10B

酒石酸钾钠(罗氏盐、罗谢尔盐,seignette saltKNaC4H4O6·4H2O

聚乙二醇(Polyethylene GlycolPEG)

考马斯亮蓝R250Coomassie brilliant blue R250

可溶性淀粉(soluble starch)

联苯胺(44-diaminobiphenyl

链霉素(streptomycin

磷酸二氢钠(sodium dihydrogen phosphateNaH2PO4

磷酸氢二钠(Dibasic Sodium Phosphate,)

硫化铵Ammonium sulfide

硫堇(劳氏紫,Thionine

硫酸(Sulphuric acid

硫酸铝钾(明矾、钾明矾,Aluminum potassium sulfate dodecahydrate

硫酸钠(sodium sulfate

硫酸铜(copper ii sulfate)

氯化铵(ammonium chloride

氯化钙(Calcium chloride

氯化钾(Potassium chloridecolchicine

氯化镁(Magnesium chlorideMgCl₂·6H2O

氯化钠(Sodium chloride)

咪唑(Imidazole

柠檬酸(枸橼酸,Citric AcidC₆H₈O₇·H2O

柠檬酸钠(枸橼酸钠,sodium citrateC6H5Na3O7·7H2O

牛肉膏(beef extract

哌嗪-1.4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bisethanesulfonic acidPIPES)

派洛宁(吡啰红,pyronin

葡萄糖glucose

青霉素(Penicillin

氢氧化钠(苛性钠、烧碱、火碱,Sodium hydroxide

秋水仙素(秋水仙碱,colchicine

巯基乙醇(2-Hydroxy-1-ethanethiol

三氯醋酸(三氯乙酸,trichloroacetic acidTCA

苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)

苏木精(苏木素、苏木紫,hematoxylin

台盼蓝(锥虫蓝、曲利苯兰Trypan blue

碳酸氢钠(重碳酸钠、小苏打,sodium bicarbonate

无水酒精(ethanol absolute

硝酸钠(sodium nitrate

硝酸铅(lead nitrate

硝酸银(Silver nitrate

盐酸(hydrochloric acid

盐酸喹吖因(Quinacrine dihydrochlorideQH

胰蛋白酶(Trypsin

詹纳斯绿BJanus green B

蔗糖(Sucrose

正丙醇(N-propanol)

植物血凝素(PhytohemagglutininPHA

试剂配制

0.2M PBS缓冲液(pH7.3)

0.2M PBS缓冲液(pH7.0)

磷酸缓冲液(PBS pH7.2)

M-缓冲液

1%Triton X-100液

0.2%考马斯亮蓝R250 染液

3%戊二醛固定液

6%淀粉肉汤

碱性磷酸酶作用液

甲醛钙固定液

0.05M乙酸缓冲液

2%硫化铵水溶液

Hanks液

7.4%碳酸氢钠水溶液

Alsver液

50%聚乙二醇(PEG)液

0.2%次甲基蓝液

4%多聚甲醛(pH7.4)

通透液(0.1% Trixton-100-0.1%柠檬酸钠溶液,pH7.4)

3%过氧化氢液

DNA酶工作液

Tunel反应混合液

秋水仙素(100㎍/毫升)

0.5%氯化钾低渗液

0.75M氯化钾水溶液

甲醛冰醋酸

RPMI 1640培养基

RPMI1640培养液

0.25%胰蛋白酶

冰存培养液

改良苯酚红染液

含台盼蓝的6%淀粉肉汤

6%淀粉肉汤

酸性磷酸酶作用液

500U/毫升肝素

1%鸡红细胞悬液

0.17M氯化钠

0.12M硫酸钠

0.17M氯化铵

0.12M草酸铵

0.32M葡萄糖

0.17%硝酸钠

0.32M丙醇

0.32M乙醇

0.32M丙三醇(甘油)

0.5%盐酸喹吖因(QH)

0.85%生理盐水

硫堇染液

吉姆萨(Giemsa)液

Carnoy液

0.25%蔗糖-0.003M氯化钙溶液

1%甲苯胺蓝染液

0.1M PBS

PEM缓冲液

PEMD缓冲液

PEMP缓冲液

3.7%甲醛-PEMD缓冲液

0.5%Triton X-100 /PEMP液

0.3% Triton X-100 /PBS

1% Triton X-100 /PBS

兔抗管蛋白血清(一抗)和FITC-羊抗兔抗体(二抗)

0.2%甲基蓝液

0.2M醋酸缓冲液(pH4.8)

甲基绿-派洛宁液

1%派洛宁液

5%三氯醋酸

0.1%酸性固绿(pH2.2)

0.1%碱性固绿(pH8.0~8.5)

0.5%硫酸铜

联苯胺(benzidine)混合液

1%番红

苏丹Ⅲ

70%酒精

10%甲醛钙

苏木精染液

1%结晶紫液

0.65%生理盐水(蟾蜍)

50%硝酸银水溶液

氨银液

3%甲醛

Ringer液

革兰氏碘液

斐林(Fehlin)试剂

冷冻保护液

0.02%詹纳斯绿B(健那绿、詹纳斯绿)水溶液

0.2M PBS缓冲液(pH7.3

甲液:0.2M磷酸二氢钠(Na2HPO4

Na2HPO4·H2O 35.61克(Na2HPO4·7H2O 53.65克,Na2HPO4·12H2O 71.64克加蒸馏水至1000毫升

乙液:0.2M磷酸氢二钠(NaH2PO4

NaH2PO4·H2O 27.60克(NaH2PO4·2H2O 31.21克)加蒸馏水至1000毫升

0.2M PBS缓冲液(pH7.0

甲液:磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O7.164克加蒸馏水至100毫升

乙液:磷酸二氢钾(KH2PO4·H2O2.72克加蒸馏水至100毫升

将甲液61毫升加乙液39毫升混合

磷酸缓冲液(PBS pH7.2)

氯化钠(NaCl)8克,氯化钾(KCl0.2.磷酸二氢钾(KH2PO4)0.2克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.15克,蒸馏水100毫升

M-缓冲液

咪唑3.4克,氯化钾(KCl3.7克,氯化镁(MgCl2·6H2O0.10165克,EGTA(乙二醇双醚四乙酸)0.33035.EDTA(乙二胺四)0.02922克,巯基乙醇0.07毫升,甘油292毫升,加蒸馏水至1000毫升

1%Triton X-100

TritonX-100 1毫升,M-缓冲液99毫升

0.2%考马斯亮蓝R250 染液

考马斯亮蓝R250 0.2克,甲醇46.5毫升,冰醋酸7毫升,蒸馏水46.5毫升

3%戊二醛固定液

25%戊二醛3毫升,PBS(pH7.0)97毫升

6%淀粉肉汤

牛肉膏0.3克,蛋白胨1克,氯化钠0.5克,可溶性淀粉6克,蒸馏水100毫升。煮沸灭菌,4℃冰箱保存.用时热水浴溶化。

碱性磷酸酶作用液

硝酸铅25毫克,0.05M醋酸缓冲液22.5毫升,搅拌溶解,缓慢滴入3%β甘油磷酸钠2.5毫升,边加边搅动,防止产生絮状沉淀

甲醛钙固定液

甲醛10毫升,10%无水氯化钙(CaCl2)水溶液10毫升,蒸馏水80毫升

 0.05M乙酸缓冲液

A:冰醋酸1.2毫升加蒸馏水至100毫升

B:醋酸钠(NaCH2COOH·3H2O2.72克加蒸馏水至100毫升

A30毫升,B70毫升,与蒸馏水300毫升混合。4℃保存。

2%硫化铵水溶液

硫化铵2克,蒸馏水98毫升

Hanks

原液:

氯化钠(NaCl80克,磷酸氢二钠(Na2HPO40.6克,氯化钾(KCl4克,磷酸二氢钾(KH2PO40.6克,硫酸镁结晶(MgSO4·7H2O2克,葡萄糖10克,无水氯化钙(CaCl21.4克,三蒸水1000毫升。4℃冰箱保存

工作液:原液100毫升,三蒸水896毫升,0.5%酚红6毫升

Hanks液另一配法:

A液:三蒸水400毫升,依次溶解:氯化钠80克,氯化钾4克,七水硫酸镁(MgSO4·7H2O0.2克,氯化钙(CaCl2·2H2O1.4克,完全溶解后加三蒸水至500毫升

B:三蒸水450毫升依次溶解:十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O1.52克或无水磷酸氢二钠0.6,磷酸二氢钾(KH2PO40.6克,葡萄糖10克,0.4%酚红50毫升

用时取AB液等量混合,用三蒸水稀释10倍,高压灭菌,4℃保存。如配制Hanks1000毫升,则取三蒸水900毫升,加入A液和B液各50毫升,混匀,4.5kg高压灭菌15分钟。用时用7.4%碳酸氢钠sodium bicarbonate溶液调pH值。

7.4%碳酸氢钠水溶液

磷酸氢二钠(Na2HPO47.4克,加三蒸水至100毫升,过滤除菌,密闭保存于4℃冰箱。

Alsver

葡萄糖2.05克,柠檬酸(C₆H₈O₇·H2O0.55克,柠檬酸钠C6H5Na3O7·7H2O0.8克,氯化钠0.42克,加蒸馏水至100毫升

50%聚乙二醇(PEG)液

分子量4000的聚乙二醇(PEG)5克置试管中在酒精灯上加热熔化。放入预热39℃Hank10毫升,混匀.

0.2%次甲基蓝液

次甲基蓝0.2克,蒸馏水100毫升

4%多聚甲醛(pH7.4)

用新配制的PBS 100毫升溶解多聚甲醛4克,调pH7.4

通透液(0.1% Trixton-100-0.1%柠檬酸钠溶液,pH7.4)

Trixton-100 1毫升

柠檬酸钠1

蒸馏水900毫升

3%过氧化氢液

过氧化氢(30%)溶于甲醇90毫升

DNA酶工作液

0.05M Tris-HCl(pH7.5)

0.01M MgCl2

1mg/ml BSABovine serum albumin,牛血清蛋白)

用时将上液稀释成70U/

Tunel反应混合液

移除100标记液用于阴性对照;50酶溶液加入到剩余的标记液,配成反应混合液

秋水仙素(100/毫升)

秋水仙素10毫克

灭菌生理盐水100毫升

0.5%氯化钾低渗液

氯化钾(KCl0.5克,

蒸馏水100毫升

0.75M氯化钾水溶液

氯化钾(KCl0.559

蒸馏水100毫升

甲醛冰醋酸

甲醛3份,冰醋酸(GAA1

RPMI 1640培养基

RPMI 1640 10.5

小牛血清(灭活)inactivating calf serum200毫升

肝素(500U/毫升) 6毫升

植物血凝素(PHA100毫克

青霉素-链霉素培养液中最终浓度为100U/毫升

RPMI1640粉末先溶于蒸馏水300毫升,再加其他成分,混匀,定容至1000毫升,5%碳酸氢钠调pH7.2,用0.22微孔滤膜过滤除菌,0℃保存。

RPMI1640培养液

称取干粉培养基10.4克,在大烧杯中溶于三蒸水500毫升,移入1000毫升容量瓶,加三蒸水至1000毫升。过滤除菌,分装,-20℃保存。

用前加血清(10~15%)、双抗(终浓度100U/毫升),用磷酸氢二钠调节pH6.8~7.04℃保存。

0.25%胰蛋白酶

胰蛋白酶0.25Hanks100毫升

冰存培养液

1640培养液(20~30%小牛血清)加入10%二甲基亚砜(DMSO或加入5%丙三醇(甘油)(高压灭菌,10磅,30分钟)

改良苯酚红染液

A:碱性品红3克溶于70%酒精100毫升(4℃冰箱保存)

B:A10毫升,加5%苯酚红水溶液90毫升(2周内使用)

B45毫升,加冰醋酸6毫升,甲醛6毫升

取上液10毫升,加45%冰醋酸90毫升和山梨醇,放置2周后使用.

含台盼蓝的6%淀粉肉汤

牛肉膏0.3克,蛋白胨0.5克,台盼蓝0.3克,蒸馏水100毫升,可溶性淀粉6克。

将上述各成分混匀,煮沸灭菌,4℃冰箱保存备用.用时水浴溶化.

6%淀粉肉汤

牛肉膏0.3克,蛋白胨1克,氯化钠(NaCl0.5克,可溶性淀粉6克,蒸馏水100毫升。煮沸灭菌,4℃保存。用时热水浴溶化。

酸性磷酸酶作用液

硝酸铅0.025克溶于0.05M醋酸缓冲液22.5毫升,搅动溶解后。缓慢逐滴加入3%β-甘油磷酸钠水溶液2.5毫升,边加边搅动,防止产生絮状沉淀。

500U/毫升肝素

肝素(12500U)2毫升,生理盐水23毫升,4℃保存

1%鸡红细胞悬液

鸡血(加抗凝剂)1毫升,生理盐水99毫升

0.17M氯化钠

氯化钠(NaCl9.935克溶于蒸馏水1000毫升

0.12M硫酸钠

硫酸钠(Na2SO417.047克溶于蒸馏水100毫升

0.17M氯化铵

氯化铵(NH4Cl9.093克溶于蒸馏水1000毫升

0.12M草酸铵

草酸铵14.892克溶于蒸馏水1000毫升

0.32M葡萄糖

葡萄糖57.651克溶于蒸馏水1000毫升

0.17%硝酸钠

硝酸钠(NaNO314.448克溶于蒸馏水1000毫升

0.32M丙醇

正丙醇(N-propanol)0.0117克溶于蒸馏水500毫升

0.32M乙醇

无水酒精18.68毫升加蒸馏水1000毫升混匀

0.32M丙三醇(甘油)

甘油23.31毫升溶于蒸馏水1000毫升

0.5%盐酸喹吖因(QH)

盐酸喹吖因(Quinacrine dihydrochlorideQH0.5

PBS(pH6.0)100毫升

棕色瓶保存于4℃冰箱

0.85%生理盐水

氯化钠0.85

蒸馏水100毫升

硫堇染液

原液:硫堇(劳氏紫,Thionine1克溶于酒精(50%)100毫升,过滤备用

缓冲液:醋酸钠9.714克,巴比妥钠14.714克,加蒸馏水至500毫升

工作液:0.1M盐酸30毫升,缓冲液28毫升,原液40毫升,混匀

吉姆萨(Giemsa)

原液:Giemsa粉末1克,甘油66毫升,甲醇66毫升

取粉末加少量甘油充分研磨呈细粒糊状,再倒入其余甘油。放入56℃温箱2小时,边研磨边加甲醇,保存于棕色瓶,2周后过滤使用

用时取原液1毫升加入PBS(pH7.2)9毫升混匀

Carnoy

甲醇 冰醋酸3:1混合

0.25%蔗糖-0.003M氯化钙溶液

蔗糖85.5克,氯化钙0.33克,蒸馏水1000毫升

1%甲苯胺蓝染液

甲苯胺蓝1克,蒸馏水100毫升

0.1M PBS

氯化钠(NaCl)8克,氯化钾(KCl0.2克,磷酸氢二钠(Na2HPO41.44克,磷酸二氢钾(KH2PO4)0.24克,定容至1000毫升,用盐酸(HCl)pH7.4

PEM缓冲液

哌嗪-1.4-二乙磺酸(PIPES)24.19克,EGTA 0.38克,氯化镁(MgCl2·6H2O0.101克,定容至1000毫升,用氢氧化钠(NaOH)调pH6.9-7.0

PEMD缓冲液

二甲亚砜(DMSO)1毫升,PEM缓冲液99毫升

PEMP缓冲液

聚乙二醇(PEG,分子量6000)4克,PEM缓冲液100毫升

3.7%甲醛-PEMD缓冲液

甲醛9.25毫升,PEM缓冲液100毫升

0.5%Triton X-100 /PEMP

Triton X-100 0.5毫升,PEMP缓冲液99.5毫升

0.3% Triton X-100 /PBS

Triton X-100 0.3毫升,PBS 99.7毫升

1% Triton X-100 /PBS

Triton X-100 1升,PBS 99毫升

兔抗管蛋白血清(一抗)FITC-羊抗兔抗体(二抗)

用前用0.3% Triton X-100 /PBS或直接用PBS稀释30倍以上.一抗和二抗在用前预试选最佳稀释度

0.2%甲基蓝液

甲基蓝0.2克,蒸馏水100毫升

0.2M醋酸缓冲液(pH4.8

A液:冰醋酸1.2毫升加蒸馏水至100毫升

B液:醋酸钠(NaCH2COOH·3H2O2.72克溶于蒸馏水100毫升

用时将AB液按23混合。

甲基绿-派洛宁液

2%甲基绿液50毫升,1%派洛宁液20毫升.现配现用

2%甲基绿液:去杂质的甲基绿粉2克溶于0.2M醋酸缓冲液(pH4.8)100毫升

甲基绿提纯:甲基绿溶于水,装入分液漏斗,用足量氯仿,用力振荡,静置,去掉含甲基紫的氯仿,再加等量氯仿,重复数次,直到氯仿中无甲基紫为止.最后放40℃温箱干燥备用

1%派洛宁液

派洛宁1克溶于0.2M醋酸缓冲液(pH4.8)

5%三氯醋酸

三氯醋酸(TCA5克溶于蒸馏水100毫升

0.1%酸性固绿(pH2.2)

固绿(Fast green FCF0.2克溶于蒸馏水100毫升;取盐酸(比重1.19)0.11毫升加蒸馏水至100毫升.用时二液等量混合

另一配法:0.2%固绿水溶液100毫升,1.75%盐酸100毫升,混合后调pH2.2

0.1%碱性固绿(pH8.0~8.5)

固绿0.2克溶于蒸馏水100毫升;取碳酸氢钠0.05克溶于蒸馏水100毫升.用时二液等量混合

0.5%硫酸铜

硫酸铜(CuSO4)0.5克溶于蒸馏水100毫升

联苯胺(benzidine)混合液

联苯胺0.2克溶于蒸馏水100毫升,加3%过氧化氢1.5毫升加蒸馏水至50毫升)2

1%番红

番红粉1克溶于蒸馏水100毫升

苏丹

苏丹Ⅲ0.1克,95%酒精20毫升

70%酒精

无水酒精70毫升,蒸馏水30毫升

:95%酒精70毫升加蒸馏水至25毫升

10%甲醛钙

甲醛10毫升,醋酸钙2克,蒸馏水加至100毫升

苏木精染液

苏木精5克,无水酒精200毫升,硫酸铝钾20克,甘油200毫升,蒸馏水100毫升,冰醋酸20毫升。

将染液盛入玻璃瓶内,并口盖上几层纱布,放在有阳光照射的台面上,6周后成熟。

1%结晶紫液

结晶紫1克,蒸馏水100毫升

0.65%生理盐水(蟾蜍)

氯化钠(NaCl0.65克,蒸馏水100毫升

50%硝酸银水溶液

硝酸银(AgNO350克,蒸馏水100毫升

氨银液

硝酸银(AgNO34克,蒸馏水5毫升,浓氨水5毫升

3%甲醛

甲醛3毫升,蒸馏水7毫升

Ringer

氯化钠(NaCl0.85克,氯化钾(KCl0.042克,氯化钙(CaCl20.025克,蒸馏水100毫升

革兰氏碘液

碘(I1克,碘化钾(KI2克,蒸馏水300毫升

将碘和碘化钾混合,加蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解,加蒸馏水至300毫升

斐林(Fehlin)试剂

甲液:氢氧化钠(NaOH125克,酒石酸钾钠137克,蒸馏水加至500毫升

乙液:结晶硫酸铜(CuSO434.5克,硫酸(H2SO40.5毫升,蒸馏水加至500毫升

用时将二液等量混合。

冷冻保护液

细胞培养液9毫升,二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxideDMSO1毫升。现用现配。或配好后放冰箱内冷冻保存,用前于室温下水浴溶解。

0.02%詹纳斯绿B(健那绿、詹纳斯绿)水溶液

詹纳斯绿B0.05克溶于Ringer5毫升,稍加热(30~40℃)溶解,过滤。

取滤液1毫升,加入Ringer49毫升。现用现配。

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