试剂
25%戊二醛(glutaraldehyde)
BSA(Bovine serum albumin,牛血清蛋白)
EDTA(乙二胺四酸,ethylene glycol tetraacetic acid)
EGTA(乙二醇双醚四乙酸,ethylene glycol tetraacetic acid)
Giemsa粉末
TritonX-100(C14H22O(C2H4O)n)
β甘油磷酸钠(β-Sodium glycerophosphate)
氨水(Aqueous ammonia)
巴比妥钠(佛拿罗纳,Barbital Sodium)
冰醋酸(glacial acetic acid)
丙三醇(甘油Glycerol)
草酸铵(ammonium oxalate)
次甲基蓝(亚甲基蓝、亚甲蓝、美蓝、品蓝,methylene blue)
醋酸钙(乙酸钙,Calcium acetate)
醋酸钠(乙酸钠,sodium acetate,NaCH2COOH·3H2O)
蛋白胨(peptone)
碘(Iodine)
碘化钾(Potassium iodide)
多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)
番红(safranin)
酚红(Phenol Red)
甘油(Glycerol)
肝素(heparin)
固绿(快绿FCF,Fast green FCF)
过氧化氢(30%)(hydrogen peroxide)
甲苯胺蓝(ToluidineBlue O)
甲醇(木醇、木精、羟基甲烷,Methanol)
甲基蓝(油脂蓝、棉蓝、溶剂蓝8B、酸性蓝93、品蓝,Methyl blue)
甲基绿(Methyl Green)
甲醛(蚁醛,Formaldehyde)
碱性品红(玫瑰苯胺、盐基品红,basic fuchsin)
结晶紫(crystal violet,龙胆紫gentian violet,甲基紫10B)
酒石酸钾钠(罗氏盐、罗谢尔盐,seignette salt,KNaC4H4O6·4H2O)
聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)
考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)
可溶性淀粉(soluble starch)
联苯胺(4,4′-diaminobiphenyl)
链霉素(streptomycin)
磷酸二氢钠(sodium dihydrogen phosphate,NaH2PO4)
磷酸氢二钠(Dibasic Sodium Phosphate,)
硫化铵(Ammonium sulfide)
硫堇(劳氏紫,Thionine)
硫酸(Sulphuric acid)
硫酸铝钾(明矾、钾明矾,Aluminum potassium sulfate dodecahydrate)
硫酸钠(sodium sulfate)
硫酸铜(copper ii sulfate)
氯化铵(ammonium chloride)
氯化钙(Calcium chloride)
氯化钾(Potassium chloride,colchicine)
氯化镁(Magnesium chloride,MgCl₂·6H2O)
氯化钠(Sodium chloride)
咪唑(Imidazole)
柠檬酸(枸橼酸,Citric Acid,C₆H₈O₇·H2O)
柠檬酸钠(枸橼酸钠,sodium citrate,C6H5Na3O7·7H2O)
牛肉膏(beef extract)
哌嗪-1.4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bisethanesulfonic acid,PIPES)
派洛宁(吡啰红,pyronin)
葡萄糖(glucose)
青霉素(Penicillin)
氢氧化钠(苛性钠、烧碱、火碱,Sodium hydroxide)
秋水仙素(秋水仙碱,colchicine)
巯基乙醇(2-Hydroxy-1-ethanethiol)
三氯醋酸(三氯乙酸,trichloroacetic acid,TCA)
苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)
苏木精(苏木素、苏木紫,hematoxylin)
台盼蓝(锥虫蓝、曲利苯兰,Trypan blue)
碳酸氢钠(重碳酸钠、小苏打,sodium bicarbonate)
无水酒精(ethanol absolute)
硝酸钠(sodium nitrate)
硝酸铅(lead nitrate)
硝酸银(Silver nitrate)
盐酸(hydrochloric acid)
盐酸喹吖因(Quinacrine dihydrochloride,QH)
胰蛋白酶(Trypsin)
詹纳斯绿B(Janus green B)
蔗糖(Sucrose)
正丙醇(N-propanol)
植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)
试剂配制
通透液(0.1% Trixton-100-0.1%柠檬酸钠溶液,pH7.4)
甲液:0.2M磷酸二氢钠(Na2HPO4)
Na2HPO4·H2O 35.61克(Na2HPO4·7H2O 53.65克,Na2HPO4·12H2O 71.64克加蒸馏水至1000毫升
乙液:0.2M磷酸氢二钠(NaH2PO4)
NaH2PO4·H2O 27.60克(NaH2PO4·2H2O 31.21克)加蒸馏水至1000毫升
甲液:磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)7.164克加蒸馏水至100毫升
乙液:磷酸二氢钾(KH2PO4·H2O)2.72克加蒸馏水至100毫升
将甲液61毫升加乙液39毫升混合
氯化钠(NaCl)8克,氯化钾(KCl)0.2克.磷酸二氢钾(KH2PO4)0.2克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.15克,蒸馏水100毫升
咪唑3.4克,氯化钾(KCl)3.7克,氯化镁(MgCl2·6H2O)0.10165克,EGTA(乙二醇双醚四乙酸)0.33035克.EDTA(乙二胺四)0.02922克,巯基乙醇0.07毫升,甘油292毫升,加蒸馏水至1000毫升
TritonX-100 1毫升,M-缓冲液99毫升
考马斯亮蓝R250 0.2克,甲醇46.5毫升,冰醋酸7毫升,蒸馏水46.5毫升
25%戊二醛3毫升,PBS(pH7.0)97毫升
牛肉膏0.3克,蛋白胨1克,氯化钠0.5克,可溶性淀粉6克,蒸馏水100毫升。煮沸灭菌,4℃冰箱保存.用时热水浴溶化。
硝酸铅25毫克,0.05M醋酸缓冲液22.5毫升,搅拌溶解,缓慢滴入3%β甘油磷酸钠2.5毫升,边加边搅动,防止产生絮状沉淀
甲醛10毫升,10%无水氯化钙(CaCl2)水溶液10毫升,蒸馏水80毫升
A液:冰醋酸1.2毫升加蒸馏水至100毫升
B液:醋酸钠(NaCH2COOH·3H2O)2.72克加蒸馏水至100毫升
取A液30毫升,B液70毫升,与蒸馏水300毫升混合。4℃保存。
硫化铵2克,蒸馏水98毫升
原液:
氯化钠(NaCl)80克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.6克,氯化钾(KCl)4克,磷酸二氢钾(KH2PO4)0.6克,硫酸镁结晶(MgSO4·7H2O)2克,葡萄糖10克,无水氯化钙(CaCl2)1.4克,三蒸水1000毫升。4℃冰箱保存
工作液:原液100毫升,三蒸水896毫升,0.5%酚红6毫升
Hanks液另一配法:
A液:三蒸水400毫升,依次溶解:氯化钠80克,氯化钾4克,七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2克,氯化钙(CaCl2·2H2O)1.4克,完全溶解后加三蒸水至500毫升
B液:三蒸水450毫升依次溶解:十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)1.52克或无水磷酸氢二钠0.6,磷酸二氢钾(KH2PO4)0.6克,葡萄糖10克,0.4%酚红50毫升
用时取A、B液等量混合,用三蒸水稀释10倍,高压灭菌,4℃保存。如配制Hanks液1000毫升,则取三蒸水900毫升,加入A液和B液各50毫升,混匀,4.5kg高压灭菌15分钟。用时用7.4%碳酸氢钠(sodium bicarbonate)溶液调pH值。
磷酸氢二钠(Na2HPO4)7.4克,加三蒸水至100毫升,过滤除菌,密闭保存于4℃冰箱。
葡萄糖2.05克,柠檬酸(C₆H₈O₇·H2O)0.55克,柠檬酸钠(C6H5Na3O7·7H2O)0.8克,氯化钠0.42克,加蒸馏水至100毫升
分子量4000的聚乙二醇(PEG)5克置试管中在酒精灯上加热熔化。放入预热39℃的Hank液10毫升,混匀.
次甲基蓝0.2克,蒸馏水100毫升
用新配制的PBS 100毫升溶解多聚甲醛4克,调pH至7.4
Trixton-100 1毫升
柠檬酸钠1克
蒸馏水900毫升
过氧化氢(30%)溶于甲醇90毫升
0.05M Tris-HCl(pH7.5)
0.01M MgCl2
1mg/ml BSA(Bovine serum albumin,牛血清蛋白)
用时将上液稀释成70U/㎕
移除100㎕标记液用于阴性对照;将50㎕酶溶液加入到剩余的标记液,配成反应混合液
秋水仙素10毫克
灭菌生理盐水100毫升
氯化钾(KCl)0.5克,
蒸馏水100毫升
氯化钾(KCl)0.559克
蒸馏水100毫升
甲醛3份,冰醋酸(GAA)1份
RPMI 1640 10.5克
小牛血清(灭活)(inactivating calf serum)200毫升
肝素(500U/毫升) 6毫升
植物血凝素(PHA)100毫克
青霉素-链霉素培养液中最终浓度为100U/毫升
RPMI1640粉末先溶于蒸馏水300毫升,再加其他成分,混匀,定容至1000毫升,5%碳酸氢钠调pH至7.2,用0.22㎛微孔滤膜过滤除菌,0℃保存。
称取干粉培养基10.4克,在大烧杯中溶于三蒸水500毫升,移入1000毫升容量瓶,加三蒸水至1000毫升。过滤除菌,分装,-20℃保存。
用前加血清(10~15%)、双抗(终浓度100U/毫升),用磷酸氢二钠调节pH为6.8~7.0,4℃保存。
胰蛋白酶0.25克Hanks液100毫升
1640培养液(含20~30%小牛血清)加入10%二甲基亚砜(DMSO)或加入5%丙三醇(甘油)(高压灭菌,10磅,30分钟)
A液:碱性品红3克溶于70%酒精100毫升(4℃冰箱保存)
B液:A液10毫升,加5%苯酚红水溶液90毫升(2周内使用)
取B液45毫升,加冰醋酸6毫升,甲醛6毫升
取上液10毫升,加45%冰醋酸90毫升和山梨醇,放置2周后使用.
牛肉膏0.3克,蛋白胨0.5克,台盼蓝0.3克,蒸馏水100毫升,可溶性淀粉6克。
将上述各成分混匀,煮沸灭菌,4℃冰箱保存备用.用时水浴溶化.
牛肉膏0.3克,蛋白胨1克,氯化钠(NaCl)0.5克,可溶性淀粉6克,蒸馏水100毫升。煮沸灭菌,4℃保存。用时热水浴溶化。
硝酸铅0.025克溶于0.05M醋酸缓冲液22.5毫升,搅动溶解后。缓慢逐滴加入3%β-甘油磷酸钠水溶液2.5毫升,边加边搅动,防止产生絮状沉淀。
肝素(12500U)2毫升,生理盐水23毫升,4℃保存
鸡血(加抗凝剂)1毫升,生理盐水99毫升
氯化钠(NaCl)9.935克溶于蒸馏水1000毫升
硫酸钠(Na2SO4)17.047克溶于蒸馏水100毫升
氯化铵(NH4Cl)9.093克溶于蒸馏水1000毫升
草酸铵14.892克溶于蒸馏水1000毫升
葡萄糖57.651克溶于蒸馏水1000毫升
硝酸钠(NaNO3)14.448克溶于蒸馏水1000毫升
正丙醇(N-propanol)0.0117克溶于蒸馏水500毫升
无水酒精18.68毫升加蒸馏水1000毫升混匀
甘油23.31毫升溶于蒸馏水1000毫升
盐酸喹吖因(Quinacrine dihydrochloride,QH)0.5克
PBS(pH6.0)100毫升
棕色瓶保存于4℃冰箱
氯化钠0.85克
蒸馏水100毫升
原液:硫堇(劳氏紫,Thionine)1克溶于酒精(50%)100毫升,过滤备用
缓冲液:醋酸钠9.714克,巴比妥钠14.714克,加蒸馏水至500毫升
工作液:0.1M盐酸30毫升,缓冲液28毫升,原液40毫升,混匀
原液:Giemsa粉末1克,甘油66毫升,甲醇66毫升
取粉末加少量甘油充分研磨呈细粒糊状,再倒入其余甘油。放入56℃温箱2小时,边研磨边加甲醇,保存于棕色瓶,2周后过滤使用
用时取原液1毫升加入PBS(pH7.2)9毫升混匀
甲醇 冰醋酸3:1混合
蔗糖85.5克,氯化钙0.33克,蒸馏水1000毫升
甲苯胺蓝1克,蒸馏水100毫升
氯化钠(NaCl)8克,氯化钾(KCl)0.2克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.44克,磷酸二氢钾(KH2PO4)0.24克,定容至1000毫升,用盐酸(HCl)调pH至7.4
哌嗪-1.4-二乙磺酸(PIPES)24.19克,EGTA 0.38克,氯化镁(MgCl2·6H2O)0.101克,定容至1000毫升,用氢氧化钠(NaOH)调pH至6.9-7.0
二甲亚砜(DMSO)1毫升,PEM缓冲液99毫升
聚乙二醇(PEG,分子量6000)4克,PEM缓冲液100毫升
甲醛9.25毫升,PEM缓冲液100毫升
Triton X-100 0.5毫升,PEMP缓冲液99.5毫升
Triton X-100 0.3毫升,PBS 99.7毫升
Triton X-100 1升,PBS 99毫升
用前用0.3% Triton X-100 /PBS或直接用PBS稀释30倍以上.一抗和二抗在用前预试选最佳稀释度
甲基蓝0.2克,蒸馏水100毫升
A液:冰醋酸1.2毫升加蒸馏水至100毫升
B液:醋酸钠(NaCH2COOH·3H2O)2.72克溶于蒸馏水100毫升
用时将A、B液按2:3混合。
2%甲基绿液50毫升,1%派洛宁液20毫升.现配现用
2%甲基绿液:去杂质的甲基绿粉2克溶于0.2M醋酸缓冲液(pH4.8)100毫升
甲基绿提纯:甲基绿溶于水,装入分液漏斗,用足量氯仿,用力振荡,静置,去掉含甲基紫的氯仿,再加等量氯仿,重复数次,直到氯仿中无甲基紫为止.最后放40℃温箱干燥备用
派洛宁1克溶于0.2M醋酸缓冲液(pH4.8)
三氯醋酸(TCA)5克溶于蒸馏水100毫升
固绿(Fast green FCF)0.2克溶于蒸馏水100毫升;取盐酸(比重1.19)0.11毫升加蒸馏水至100毫升.用时二液等量混合
另一配法:0.2%固绿水溶液100毫升,1.75%盐酸100毫升,混合后调pH至2.2。
固绿0.2克溶于蒸馏水100毫升;取碳酸氢钠0.05克溶于蒸馏水100毫升.用时二液等量混合
硫酸铜(CuSO4)0.5克溶于蒸馏水100毫升
联苯胺0.2克溶于蒸馏水100毫升,加3%过氧化氢1.5毫升加蒸馏水至50毫升)2滴
番红粉1克溶于蒸馏水100毫升
苏丹Ⅲ0.1克,95%酒精20毫升
无水酒精70毫升,蒸馏水30毫升
或:95%酒精70毫升加蒸馏水至25毫升
甲醛10毫升,醋酸钙2克,蒸馏水加至100毫升
苏木精5克,无水酒精200毫升,硫酸铝钾20克,甘油200毫升,蒸馏水100毫升,冰醋酸20毫升。
将染液盛入玻璃瓶内,并口盖上几层纱布,放在有阳光照射的台面上,6周后成熟。
结晶紫1克,蒸馏水100毫升
氯化钠(NaCl)0.65克,蒸馏水100毫升
硝酸银(AgNO3)50克,蒸馏水100毫升
硝酸银(AgNO3)4克,蒸馏水5毫升,浓氨水5毫升
甲醛3毫升,蒸馏水7毫升
氯化钠(NaCl)0.85克,氯化钾(KCl)0.042克,氯化钙(CaCl2)0.025克,蒸馏水100毫升
碘(I)1克,碘化钾(KI)2克,蒸馏水300毫升
将碘和碘化钾混合,加蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解,加蒸馏水至300毫升
甲液:氢氧化钠(NaOH)125克,酒石酸钾钠137克,蒸馏水加至500毫升
乙液:结晶硫酸铜(CuSO4)34.5克,硫酸(H2SO4)0.5毫升,蒸馏水加至500毫升
用时将二液等量混合。
细胞培养液9毫升,二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)1毫升。现用现配。或配好后放冰箱内冷冻保存,用前于室温下水浴溶解。
詹纳斯绿B0.05克溶于Ringer液5毫升,稍加热(30~40℃)溶解,过滤。
取滤液1毫升,加入Ringer液49毫升。现用现配。
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