用酸类如硝酸、甲酸等脱钙的骨组织,苏木精伊红染色时常出现核浅浆(质)红的情况,处理方法是相应延长苏木精的染色时间(20~30分钟),减少伊红染色时间(数秒)。也可以改用下法,效果很好。
方法:(室温22~25℃)
⑴切片用松节油或二甲苯脱蜡。
⑵无水酒精洗30秒。
⑶入1%火棉胶液浸泡2秒(防脱片),稍干。
⑷无水酒精30~60秒,
⑸经各级酒精下行至水。
⑹1%硫酸钠水溶液3~5分钟。
⑺ 流水冲洗5分钟,蒸馏水浸洗30~60秒。
⑻入苏木精液染色7~15分钟。
苏木精液: 苏木精3克,钾明矾50克,蒸馏水800毫升,碘酸钠0.6克,甘油200毫升,无水酒精5毫升
无水酒精与苏木精研磨,将蒸馏水加热溶解钾明矾。将苏木精倒入钾明矾液,再加入碘酸钠,冷却后加入甘油,摇荡1小时后使用。
⑼盐酸酒精分色5~7秒,流水洗至核呈蓝色。
⑽入0.5%复制伊红液1分钟。
⑾入正丁醇-无水酒精混合液(3:2)分色和脱水。
⑿二甲苯透明,中性树胶封片。
Bock苏木精-伊红染色法
对制作骨发生标本很好。
⑴组织固定于下液8~30天。
固定液:Müller液25毫升,5%甲醛100毫升
⑵ 用von Ebner法脱钙或5%硝酸脱钙。
von Ebner盐酸脱钙液:氯化钠饱和水溶液100毫升加盐酸4毫升(牙齿加20毫升)。每日再加盐酸1~2毫升,直到钙胶尽。入稀氨水中和。
Schaffer硝酸脱钙法:固定后的骨组织入5%硝酸水溶液至组织充分软化为止。对较大的管状骨应经常换脱钙液。然后入5%硫酸钠中和24小时,自来水洗24小时,脱水,包埋。
⑶入5%钾矾水溶液24小时或氯化钠半饱和水溶液6天。
⑷流水洗1~2天。
⑸ 脱水,火棉胶包埋或石蜡包埋(骨发生)。
⑹ 切片用Hansen苏木精染12~18小时。
⑺用甘油冰醋酸等量混合液分化5~20分钟或更久。若脱色过慢,适当减少苏木精染色时间。
⑻ 自来水洗1小时。
⑼ 0.4%伊红75%酒精溶液染5分钟。
⑽95%酒精分色,无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。(石蜡切片)
⑾切片经95%酒精,入石炭酸二甲苯、纯二甲苯透明,封固(火棉胶切片)。
结果:钙化骨蓝色,无钙化骨红色。
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