苏木素的种类及其配制法
苏木素是一种天然染料，它的获得是从苏木素的树心提炼而成的，市售略带浅褐色结晶，易溶于酒精和甘油，较难溶于水，需加热才能溶解。苏木素产生于墨西哥的坎佩切，国内使用的几乎都为进口。
苏木素作为单一的染色是不行的，它染色力弱，必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红，二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得，获得苏木红有两种方法，一是天然成熟，苏木素与其它试剂混合好后，暴露于阳光或亮处，在自然光的作用下，慢慢地氧化成熟，但时间较长，一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟色氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。快速成熟的苏木素溶液有的可马上使用如Mayer氏苏木素，有的则需隔天使用。
苏木素种类较多，用法各异，有的用于常规染色，有的则用于特殊染色。
Gill改良苏木素
配制时，先将2g苏木色精溶于250ml无水酒精，再将17.6g硫酸铝溶于750ml蒸馏水，然后两液混合后加入0.2—0.3g碘酸钠，最后加入15—25ml冰醋酸。
此溶液为半氧化进行性苏木素液，不会产生沉淀，氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢，可能是碘酸钠量的原因，可根据气温变化多加一点（气温在30℃时，一般碘酸钠量为0.25g，气温每降低5度，可增加0.01g，反之可减少）。有人用硫酸铝钾代替硫酸铝，也可以，着色能力略强于硫酸铝，染液会产生沉淀和结晶。也可以采用加温溶解配制，可促进氧化，增强着色能力。
改良苏木精液
由于Gill改良苏木精液中苏木精含量较少，染色较慢，颜色不深，因此，我们对配方作了改良，增加苏木精的量，增强了着色能力。
苏木精 5g 无水酒精 400 ml
十八水硫酸铝 44 g 蒸馏水 1000 ml
碘酸钠 0.4-0.5 g 冰醋酸 20-50 ml
配制：先将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，然后将两液混合( 如果在室温低于23-24℃时，可以选择在混合后加温至50-60℃), 然后加入碘酸钠，最好过几天后再加入乙酸（乙酸的量关系到苏木素的染色能力及选择能力。乙酸加的多，苏木素选择性强，背景干净，但着色能力弱，反之，乙酸加的少，苏木素选择性差，核着色强，背景深。因此，刚开始加乙酸宁可少不要多，根据染色情况适量增加）。此苏木精液需要分化，在有效期内每500ml可染切片1500-2000张左右。此配方氧化膜较少甚至没有，因此，配方中没有加丙三醇，从而减少苏木素的非特异性着色（特别是胃肠黏膜）。
经过解剖室老师多年的经验，Delafied苏木素液最好用，用的还比较久，配方如下：
1）甲液：铵明矾55克，蒸馏水600毫升；
2）乙液：苏木素6克，95%乙醇50毫升；
3）丙液：甘油150毫升，95%乙醇150毫升。
将上述三液分别配制后，先将甲、乙两夜混合，放置过夜，过滤后加入丙液；三液混合后置于日光充足处1-2个月使其自然成熟即可使用。
（1）明矾苏木素
1．Harris氏苏木素（1990）
苏木素 2.5g
无水酒精 25ml
硫酸铝钾（钾明矾） 50g
或硫酸铝铵（铵明矾）
蒸馏水 500ml
黄*色氧化汞 1.25g
冰醋酸 20ml
该溶液为当前最广泛使用的染液，由于它染色时间短，效果好，很受使用者的欢迎。
配制时，先将苏木素溶于酒精（平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好，贮存备用），取一2000ml的三角烧瓶，倾入钾明矾，加入蒸馏水，于电炉上加热，熔解钾明矾，完全熔解后，待温度至90℃左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至沸腾，延续3-5min，此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄*色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变深紫色，拔去电源，直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸，即可使用三个月，但据我们的实践及多年的经验认为，只要掌握好切片的“无水化”，该染液可反复使用达一年之久（天天使用）。
注意事项：
①苏木素一定要预先溶解，否则较难彻底溶解。
②加入黄色氧化汞后，可产生大量的气泡，因此，配制500ml的溶液，一定要选择2000ml以上的容器，否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后，应终止氧化，烧瓶应直接插入冰水中，不要担心玻璃瓶会爆裂，因三角烧瓶经特殊处理的，不会有爆裂的危险，如果有，那是属于产品质量问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化，以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸，不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤，过滤速度将非常慢，这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀，增加了密度，使溶液不易通过，导致过滤时间延长。
⑤该苏木素在使用一段时间后，可以在表面产生金属膜。当出现这种现象时，可用粗滤纸捞去，否则贴于切片上将较难除去。
⑥苏木素加入冰醋酸后，其PH值在2－2.28之间。
2．Mayer苏木素（1903）
苏木素 0.1g
蒸馏水 100ml
硫酸铝钾 5g
柠檬酸 0.1g
水合氯醛 5g
碘酸钠 20mg
该试剂有的单位用作常规切片的染色，用它染核不会过染，时间可在20min至30min，核染色质清晰可见，核呈灰黑色，可用作特殊染色核的对比染色试剂。如果先用天青石蓝为媒染剂，染色时间可在2-3分钟完成。
配制溶液时，先将蒸馏水稍加温，加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解，继而加入硫酸铝钾，令其充分溶解后，加入柠檬酸和水合氯醛，继续搅拌均匀，全部溶解后再加入碘酸钠，搅拌均匀，此时溶液的颜色变为深棕色，过滤后即可使用。
3．Ehrlich氏苏木素（1886）
苏木素 1g
无水酒精 50ml
甘油 50ml
硫酸铝钾 7.5g
蒸馏水 50ml
冰醋酸 5ml
将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。该液 量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。但染色时间较长，需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。
4．Carazzi氏苏木素（1911）
苏木素 0.5g
甘油 100ml
硫酸铝钾 25g
蒸馏水 400ml
碘化钾 0.1g
将苏木素溶于甘油，硫酸铝钾溶于300ml的蒸馏水中搅拌至完全溶解后，混合两液，将碘化钾溶于剩余的100ml蒸馏水中，加温到溶解后，混合于上述的混合液中，搅拌均匀，过滤后即可使用，染色时间10min左右，配成后的液体可保存半年左右。
5．Cole氏苏木素（1943）
苏木素 1.5g
饱合硫酸铝钾水溶液 700ml
碘酒（1克碘溶于95%酒精99ml中） 50ml
蒸馏水 250ml
将苏木素溶于加温的蒸馏水中，然后加入碘酒溶液，继而加入饱和硫酸铝钾溶液，混和均匀后加热，直至沸腾，将瓶子插入预备的冰水中，如同配制Hari氏苏木素一样，第二天过滤，即可使用，染色时间为20min以上。
（2）铁苏木素
1．Weigert氏铁苏木素
A液： 苏木素 1g
无水酒精 100ml
将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。
B液： 29%三氯化铁水溶液 4ml
蒸馏水 95ml
盐酸 1ml
临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。因此，每次使用，需要多少配制多少，采取一次性用完，以免造成浪费。该染液具有抗弱酸的能力，因此，常用于某些特殊染色核的染色，染色时间为20-30分钟。
2．Heidenhain氏铁苏木素（1896）
A液： 苏木素 0.5g
无水酒精 10ml
蒸馏水 90ml
将苏木素溶于无水酒精，然后再加入蒸馏水，放置四周后便可成熟。
B液：硫酸铁铵 5g
蒸馏水 100ml
这种铁苏木素可以显示多种物质如：横纹肌、髓鞘、线粒体、细胞核等，可被染为深灰色至黑色。
（3）钨苏木素
磷钨酸苏木素（PTAH）
苏木素 0.5g
磷钨酸 5g
蒸馏水 500ml
取300ml蒸馏水来溶解苏木素，其余的蒸馏水溶解磷钨酸，然后两者混合在一起，搅拌均匀后放于亮处，约四周左右才可成熟使用。
该试剂可以显示多种物质，如：横纹肌、神经胶质细胞、纤维、纤维素、髓鞘、胶厚，和细胞浆等，染色时间24小时以上。这种试剂配成后，可连续使用达数年时间。
（4）钼苏木素
磷钼酸苏木素（Thomas, 1941）
A液：苏木素 2.5g
二噁烷 49ml
过氧化氢 1ml
B液：磷钼酸 16.5g
蒸馏水 44ml
二甘醇 11ml
将B液过滤，取滤液50ml加到A液中去，充分混合后，可见该试剂为深紫色，放置24小时后，才可使用。染色时间2分钟。它可显示的物质为：胶原及粗的网状纤维；亲银细胞；核、Daneth氏细胞等。
（5）铅苏木素（Solcia等，1969）
硝酸铅苏木素
A液:
1.5克苏木素溶于10ml
95%酒精中，取1.5ml
硝酸铅贮存液10ml
蒸馏水 10ml
混合上述液体，搅拌均匀后，静置30分钟后过滤。
B液： 5%硝酸铅水溶液 50ml
饱和醋酸铵水溶液 50ml
混合两液，过滤，再加入甲醛2ml。
将A和B液混合，反复搅拌后放置30分钟，过滤后可使用。染色时间37℃ 2-3小时，45℃ 1-2小时。
该试剂可将内分泌颗粒和APUD细胞颗粒显示出来，同时也可把肌肉和神经等显示出来。
二、伊红染液的配制
在普通染色法中，有了细胞核的染色还不够，还不能完整地显示整个细胞来，只有同时将细胞浆显示出来，细胞才完整。因此伊红的染色也与苏木素同等重要，就如同人的左右臂，缺一不可。
配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同种类的伊红。
市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红，在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配制得当，其效果非常好。
伊红 1g
70-75%酒精 100ml
先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片，效果很好。
伊红
水溶性伊红Y染色液分别采用常规法和改良法进行配制。
常规法：称取伊红Y1g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，充分搅拌使溶解后静置过夜。采用定性分析滤纸过滤去除残渣，取滤液备用，使用前加入0.1ml冰醋酸。
改良法：称取伊红Y1g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，充分搅拌使溶解后缓缓滴入浓盐酸2mL，玻璃棒搅拌5min后静置过夜。采用定性分析滤纸过滤，使用蒸馏水冲洗残留物2次。残渣连同滤纸一起放入60℃烘箱干燥4h。将干燥后的残渣置于500ml烧杯中，加入200ml95%乙醇，充分搅拌使溶解。使用前加用200ml95%乙醇稀释。
1）伊红（水溶性）
配方：
伊红 （水溶性） 2 .5 -5g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中，然后加浓盐酸10毫升，充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次，再过滤；将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥，加95%酒精1000毫升，配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1～2倍稀释，加入1～2%冰醋酸（促染剂：只能增加染料的着色能力，但不参与染色反应的物质）
此方法具有染色时间快，颜色鲜艳，不容易褪色，使用寿命长等特点。
（2） 伊红（醇溶性）
配方：
伊红 （醇溶性） 2.5-5 g
95%酒精 1000 ml
加冰醋酸10滴(0.5ml)，冰醋酸过多，可导致染浆时细胞核酸化。
伊红的染色速度，与其pH值相关，pH越酸，染色速度越快，pH在3.5左右，染色时间只需2-3秒，当pH在6.5左右，染色时间要2-3分钟。由于胞浆的等电点pH为4.7-5.0，故伊红pH以4.5左右为适。
我们在日常工作中1000 ml95%酒精中加0.8 g醇溶性伊红，机器染色1000张切片左右（每天）更换，结果更稳定。
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