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转录组单元(含单细胞)5天授课时间线
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2023.04.01 广东

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众所周知,我们【生信技能树】团队这些年一直在身体力行的推广马拉松学习理念,目前唯一可行的生物信息学入门策略!60个小时的线上全网直播视频课程,连续4个星期,每个星期5天,每天的晚上 3个小时互动授课(周三、周日休息)

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同期也安排了助教和实习生一起协助整理讲师的直播授课时间线,提炼内容梗概方便学员们查漏补缺,精准复现!

下面是转录组单元(含单细胞)5天授课时间线

2023/02/20

16-1 转录组-1.背景介绍(00:41:42)

  • 00:01:00 - 讲师自我介绍
  • 00:04:15 - 转录组理论,综述推荐
  • 00:10:47 - 转录组常用分析策略
  • 00:13:30 - 转录组测序原理
  • 00:26:23 - 普通转录组测序流程 质量控制 RIN值
  • 00:30:44 - 文库构建、文库质控
  • 00:36:00 - 上机测序原理,教学视频播放,提问

16-2 转录组-2.准备工作(00:11:53)

  • 00:00:30 - 提问答疑
  • 00:01:00 - 测序原理(SBS),Flowcell介绍
  • 00:11:24 - 因清晰度问题停止直播

16-3 转录组-2.准备工作-1(00:34:20)

  • 00:00:20 - 继续测序原理 ,桥式PCR,单端测序与双端测序
  • 00:09:57 - 提问答疑
  • 00:13:09 - FASTQ数据介绍导入
  • 00:15:30 - Linux语句复习(文件查看、文件查找相关命令)
  • 00:26:36 - 项目目录管理示例&演示,配套练习1

16-4 转录组-3.fastq介绍(01:11:06)

  • 00:00:10 - 提问答疑
  • 00:01:35 - FASTQ数据介绍 使用airway数据集为示例
  • 00:15:30 - 软链接数据,fastq格式(4行)
  • 00:34:20 - Phred实际例子(测序数据报告),布置课后练习1-2,练习答疑
  • 00:44:30 - 习题讲解 ,布置习题4-5
  • 01:09:12 - 课后总结 课后答疑

2023/02/21

17-1 转录组-4.原始数据qc(00:52:27)

  • 00:00:10 - 学员准备,讲解习题1 4-5题,描述测量了多少数据量
  • 00:18:19 - 数据质量评估,fastqc软件
  • 00:23:39 - 脚本后台运行 nohup & 如何写日志文件
  • 00:37:36 - 布置练习2,课堂操作
  • 00:39:26 - 数据质控报告-基础信息
  • 00:46:04 - 数据量的统计单位
  • 00:47:51 - 数据质控报告-base sequence quality,布置思考题

17-2 转录组-5.数据过滤1(00:58:06)

  • 00:00:30 - 质控报告-pre tile sequence quality
  • 00:04:33 - per sequence quality score
  • 00:07:53 - per base sequence content
  • 00:10:33 - per sequence GC content
  • 00:13:13 - per base N content / sequence length distribution
  • 00:15:23 - sequence duplication levels/ overrepresented sequence......
  • 00:17:53 - mulitqc报告
  • 00:23:28 - 提问答疑
  • 00:24:37 - 低质量过滤(过滤条件)trim_galore,代码演示
  • 00:41:06 - 提问答疑
  • 00:45:53 -  任务管理(任务投递、终止任务、任务查看)
  • 00:56:42 - 脚本检查:echo

17-3 转录组-6.数据过滤2(00:47:51)

  • 00:00:03 - 提问答疑
  • 00:01:37 - 过滤软件2-fastp,代码演示
  • 00:16:49 - fastq练习,提问答疑
  • 00:25:47 - fastq报告讲解
  • 00:38:30 - 总结
  • 00:43:35 - 提问答疑

2023/02/23

18-1 转录组-7.参考基因组介绍(00:56:44)

  • 00:01:36 - 参考基因组准备 fasta gff/gtf  Ensembl
  • 00:14:35 - 下载参考基因组演示
  • 00:31:45 - fasta数据格式介绍
  • 00:39:07 - gff/gtf文件介绍
  • 00:52:23 - Ensembl基因组数据库ID
  • 00:55:59 - 布置习题fastq转fasta

18-2 转录组-8.数据比对(00:51:17)

  • 00:00:10 - 提问答疑,布置课后思考题
  • 00:03:16 - 数据比对(建索引、比对参考基因组、sam转bam)
  • 00:09:19 - Hisat2主要参数,构建索引,代码演示
  • 00:20:29 - sam转bam演示,多样本演示
  • 00:26:49 - 查看比对结果
  • 00:30:40 - 运行练习3,布置课外习题
  • 00:34:10 - 比对结果文件 sam/bam讲解
  • 00:42:26 - FLAG、CIGAR详解
  • 00:48:31 - sam/bam文件查看

18-3 转录组-9.定量表达(00:51:32)

  • 00:00:28 - subjunc比对简介
  • 00:02:19 - subjunc构建索引&代码演示
  • 00:10:31 - featureCounts简介
  • 00:12:10 - featureCounts常用参数&代码演示
  • 00:17:53 - featureCounts结果讲解与课外习题讲解
  • 00:29:30 - Salmon,从fastq可快速定量得到表达矩阵
  • 00:33:30 - Salmon参数&演示
  • 00:45:25 - 课程预告、复习

2023/02/24

19-1 转录组-10.样本相关性和重复性检验(01:02:05)

  • 00:02:08 - 数据标准化简介,除去测序深度和基因长度
  • 00:10:50 - 各种值的使用场合,数据预处理&演示
  • 00:27:03 - 样本表达总体分布,箱式图、小提琴图、密度曲线图......
  • 00:39:37 - 样本之间的相关性(聚类树、主成分、相关性)

19-2 转录组-11.差异表达分析(00:56:09)

  • 00:00:23 - 差异表达分析 degeR包说明书查看&代码演示
  • 00:07:48 - 构建对比矩阵,获得DGlist对象 &代码演示
  • 00:15:20 - 提取显著差异基因 & 代码演示
  • 00:36:50 - 获得gene symbol获得显著差异表达的结果
  • 00:40:28 - 传参脚本(R与linux之间的数据传输)
  • 00:55:40 - 提问答疑

19-3转录组-12.差异结果可视化(00:32:33)

  • 00:00:28 - 差异结果可视化-热图代码演示
  • 00:13:50 - 火山图代码演示
  • 00:19:10 - 讲解课后思考题(从gtf/gff文件中得到ID与symbol的关系)
  • 00:30:40 - 提问答疑

2023/02/25

20-1转录组-13.功能注释与功能富集分析(01:15:54)

  • 00:01:03 - 功能注释:GO数据库、KEGG数据库(通路注释)
  • 00:27:31 - 功能富集:over-prsentaion、GSEA与GSVA
  • 00:51:15 - 功能富集:GSEA(MsigDB包 GsesVis包)

20-2转录组-14.彩蛋-单细胞基础分析(01:20:52)

  • 00:01:05 - 单细胞基本分析流程
  • 00:14:48 - 数据质控&代码操作
  • 00:25:50 - 细胞聚类、可视化&代码操作
  • 00:43:49 - 差异表达分析(不同细胞亚群标记基因)&代码操作
  • 00:52:12 - 使用marker鉴定细胞类型,大类注释
  • 01:14:22 - 说明Seurat对象
  • 01:18:45 -  提问答疑

20-3生信入门结束语(00:09:43)

  • 00:00:39 - 曾老师总结 布置习题+资料分享
  • 00:07:49 - 提问答疑

写在文末

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