色谱填料的基础知识

一. 色谱填料的基本特点：

1.五大类层析技术

①.凝胶过滤（GF）

②.离子交换（IEX）

③.亲和层析（AC）

④.疏水层析（HIC）

⑤.反相层析（RPC）

2. 基架：颗粒越细、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦较高（SOURCE基架例外）

3. 物理稳定性：新一代介质较坚固，能承受高流速，但反压亦较高（SOURCE基架例外）

4. 化学稳定性：新一代介质能承受极端PH，高盐度，促溶剂和有机溶剂，利于开发分离条件和在位清洗（CIP），大大延长介质寿命并提高重复性。

二. 如何选择层析填料：

1. 按照层析技术原理分类选择填料

2. 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律

3. 根据目的物的性质选择填料

4. 根据规模选择合适的层析预装柱

5. 层析空柱选择

三. 按照层析技术原理分类选择填料

1. 凝胶过滤填料选择：

①. 原理：是根据分子量大小分离物质的一种层析方法

②. 精度：分子量差别一倍以上

③. 重点：选择分离范围

④. 类型：Sephadex、Superdex、Sephacryl、Sepharose、Superose

2. 离子交换填料选择：

①. 原理：根据生物分子的表面电荷性质进行分离纯化，可以应用在层析的各个阶段

②. 重点：在于选择合适的分辨率

③. 基架类型：Sepharose、Source、Capto、Sephadex、纤维素

3. 亲和填料选择

①. 原理：根据生物分子之间的特异相互作用分离纯化蛋白质，只要有合适的配基，即可采用亲和层析

②. 重点：选择合适的配基

③. 选择：抗体以及Fc融合蛋白、重组的标签蛋白、族特异性生物分子、预活化的亲和填料

4. 疏水填料选择

①. 原理：根据蛋白质上的疏水性质分离

②. 重点：选择填料的疏水性强弱

③. 选择：苯基高取代>苯基低取代>辛基>丁基>异丙基>醚基

5. 反相填料选择（根据分辨率的高低依次为）：

①. uRPC C2/C18：只有预装柱形式，HPLC分析柱

②. SOURCE 5RPC：只有预装柱形式，用于分析

③. SOURCE 15RPC：用于精细纯化

④. SOURCE 30RPC：良好的可防性