显带染色体核型（二）

上一期已简单介绍了染色体显带技术的发展由来及A、B组染色体的形态特点（显带染色体核型（一）），本期将继续介绍染色体G显带操作流程及其它各组染色体的形态特点。

一、人类染色体G显带标本制备

1、实验原理

G显带是指经Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料由噻嗪和曙红组成，着色时DNA先与2个噻嗪分子结合，随后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。一般而言，Giemsa阳性显带（G深带，R浅带）富含AT，复制较迟，基因较少；Giemsa阴性显带（G浅带，R深带）富含GC，复制较早，基因较多。

2、实验用品

光学显微镜、恒温水浴箱、立式染色缸、染色体玻片标本（75℃中烤片2-3小时，未经染色）、0.5～1M氢氧化钠溶液、0.4%酚红溶液、生理盐水或 pH为7.4的1/15M磷酸缓冲液；胰蛋白酶：用生理盐水配成2.5%的贮存液，冰冻保存；Giemsa染色液：蒸馏水配成6%浓度，临用前配制。

3、实验用品

（1）将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2-3小时，转入37℃培养箱中备用，一般在第3~7天进行显带。

（2）取2.5%的胰蛋白酶储存液2.5ml加生理盐水至50ml，配成0.125%的工作液并用NaHCO/NaOH调pH值至7左右。

（3）将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。

（4）将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动，使胰蛋白酶的作用均匀，处理1~2分钟（精确的时间自行摸索）。

（5）立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。

（6）染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1：10的Giemsa原液和pH6.8的磷酸缓冲液）中染色10分钟左右（精确的时间自行摸索）。

（7）自来水冲洗（用细水小心冲洗）、晾干。

（8）镜检显带效果。在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。

常见问题解析：

（1）火烧干燥法制得的标本对胰蛋白酶处理的抵抗力较空气干法标本强。

（2）标本保存的时间越长，细胞对胰蛋白酶处理的抵抗性越大。片龄很长的标本往往导致斑点状（而不是带纹）的染色体。

（3）胰蛋白酶处理时间不宜少于30秒钟。在摸索胰蛋白酶处理的时间时，可在同一玻片上分别摸索2-3个时间，经染色后即在镜下观察。如果细胞呈蓝紫色（与常规染色相似）说明胰蛋白酶的作用时间不够；如细胞的色泽为桃红色，方可。

二、C组染色体G显带示意图

6号染色体

口诀：老六小白脸，六号ｐ似小白脸；特点：６号染色体（亚中）  ｐ中段为一明显宽阔的浅带，这是6号染色体的特征。远端和近端各有一条深带，后者紧邻着丝粒。在质量较好的标本可细分ｑ有６条深带

7号染色体

口诀：老七瓶盖头，七上；特点： 7号染色体（亚中）  ｐ上有３条深带，末端一条较宽且色深，有如“瓶盖”，ｑ有３条明显的深带，远端一条较浅，且可分为两条。

8号染色体

口诀：八姐脚细裙脚长，八下；特点：8号染色体（亚中）   p最后一条深带宽浓，粗壮，两条深带被一条浅带隔开，这是8号染色体的特征；q有3－5条带，近侧段内带和末端较浅的一条带常不明显

9号染色体

口诀：九妹脖子细，九两条；特点：ｐ有3条深带，远侧的两条深带有时融为一条。ｑ有２条较亮的间隔均匀的深带，远端的一条有时一分为二，次溢痕不着色，长度变异大，但可用ｃ带等选择性染色。

10号染色体

口诀：十妹肩宽脚不长，十号ｑ三深带好；特点：10号染色体（亚中）;ｐ中段有１－２条深带，ｑ有间隔基本均匀的３条深带。远端２条相距较近。近侧的一条着色最深。

11号染色体

口诀：十一露肚膛，十一低来；特点：11号染色体（亚中）；着丝粒可能染色，ｐ中央有一宽阔的深带有时再分出较窄的一条。着丝粒可能染色。ｑ近着丝粒有一深带，中部有２条紧邻的宽阔的深带，后者常融合为一。

12号染色体

口诀：十二裙脚长，十二高；特点：12号染色体（亚中），ｐ中部为一条深带，ｑ近着丝粒有一深带，中段有一宽阔的深带，这两者之间有一明显的浅带。在较好的标本上中段宽阔的深带可分为３条。中间一条较宽，着色较浓。此外。在末端还可见另一条较窄的深带。

X染色体

口诀：X显示平衡带，Xｐｑ一担挑；特点：其长度介于7号与8号染色体之间。着丝粒有时染色淡。p中段有一条明显的深带，宛如“竹节状”。在有些标本上其远侧还可见一条窄的、着色淡的深带。此臂分为2个区，中段的深带为2区1号带。q可见4条深带，近侧的一条最明显。此臂分为2个区，近侧的这条最明显的深带为2区1号带。