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什么是基因组文库,基因组文库是如何产生的
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2023.06.08 广东

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基因组文库是一组 DNA 克隆,代表特定生物体 DNA 的全部内容。DNA克隆通过在微生物中复制繁殖。基因组文库允许研究人员从文库中分离感兴趣DNA片段研究。基因组文库在全基因组测序中很重要。

基因组文库是如何产生的

基因组文库制备步骤如下:

基因组DNA提取和纯化

用特定的限制性内切酶消化基因组DNA这可能会导致一组具有相似大小的 DNA 片段。每个片段可能包含基因组的一个或两个基因。

DNA片段插入特定类型的载体中使用相同的限制性内切酶消化载体,然后将插入片段连接到载体中。载体的选择取决于基因组的大小。载体容量如下所示。

转化为宿主在大多数情况下,宿主是细菌或酵母。在宿主复制过程中形成特定DNA片段的克隆。

库滴度的测定

文库的滴度能够了解样品中有多少转化的宿主细胞。通过稀释转化的细胞并计算每体积的细胞数量来完成的。

筛选库

筛选允许从文库中分离特定的DNA片段。它主要可以通过两种方式完成,要么通过直接选择重组体,要么检测表达。直接选择可以通过PCR和菌落杂交来完成。


基因组文库是代表特定生物体基因组中整个DNA内容的DNA片段的集合。通过将基因组的片段DNA插入载体并将重组分子转化为宿主细胞进行增殖而产生的。


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