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如果你需要大海里特定品种的鱼,你会选择用渔网直接捕捞,还是选择投放“特制”鱼饵,吸引目标鱼上钩?相信睿智的你,肯定会选择后者!
下面小编带你去看看如何在“基因大海”中靶向捕“鱼”。
背景介绍
近年来,基因编辑技术、RNAi技术、合成生物学等转基因新技术飞速发展,特别是2020年获得诺贝尔化学奖的基因编辑技术——间隔规律成簇短回文重复序列及关联蛋白(clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats/CRISPR‐associated proteins,CRISPR/Cas),已经成为最热门的基因编辑工具,为基因功能研究开创了新局面。
基因编辑依赖于经过改造的核酸酶,核酸酶在基因组中特定位置产生位点特异性双链断裂(double strand break,DSB),诱导生物体通过同源重组(homologous recombination,HR)或非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)的方式来修复 DSB(如下图所示)。HR修复的效率很低,因为需要有同源片段的存在,以其为模板才能进行修复。而 NHEJ修复,不需要模板,修复过程容易出错,从而实现靶点的碱基替换、缺失以及插入等。同时相比于转基因产品而言,基因编辑技术在受体生物内留下的痕迹较少,传统的基因检测技术(如Sanger测序)很难满足基因编辑产品的定性和定量,特别是NHEJ这类只涉及少量碱基改变的编辑产物。因此,需要加强检测新技术的研究,建立针对基因编辑产品等新技术产品的检测方法。
NHEJ
HDR
扩增子(靶向测序)概述
扩增子测序是一种高度特异和靶向的方法,将待检测的靶区域富集之后,通过二代测序(NGS)结合生物信息方法对靶区域进行组装和序列分析的一种技术,用于分析特定靶标区域中的基因变异。它可根据不同的应用,利用较低的数据量得到理想的灵敏度和准确度。相较全基因组与全外显子测序,靶向测序能够聚焦目标区域,去除冗余数据干扰,测序成本低且测序深度深,能高效经济发挥NGS技术的优势,并广泛应用到基因编辑、临床检测、疾病筛查等众多领域。
在基因编辑领域,舒桐科技可提供基于扩增子基因编辑产品在靶和脱靶位点编辑效率的检测服务,可定制检测位点数量和类型。突变类型涵盖单碱基编辑、小片段插入和缺失等,CRISPResso2分析软件经严格的计算机系统验证,保证生信分析的准确性。软件支持比对算法:
Needleman-Wunsch,根据需求自由选择和定制参数。支持PE、BE、Cas9/12a等多种编辑模式。支持单样本和配对样本分析两种模式。
舒桐科技扩增子测序技术路线
舒桐科技扩增子测序优势
1)针对性强
比起全基因组水平的研究,目标区域扩增子测序更具有针对性,对客户指定位点,特异性设计扩增引物,经过引物优化及修饰,通过特异性PCR捕获所有位点。
2)信息量大
目标区域扩增子测序可以完整覆盖整个基因区域,能检测到编辑后产生的Indel情况,可进行下游切割产物分析。
3)效率极高
基于二代测序技术的目标区域测序更加快速、高效,同时检测上百个脱靶位点,比起使用Sanger法的候选基因测序方法,脱靶率验证效率更高,也更加敏感;
4)精准度高
扩增子的高测序深度保证了更准确的测序结果,同时可与本公司提供的GUIDE-seq及AID-seq脱靶检测服务联合应用,双重验证脱靶的真实性和准确性。
示例报告
扩增子测序示例报告(部分)
同时,聚焦上游基因治疗,舒桐科技可以提供基因治疗几大主流工具:慢病毒包装、非整合型慢病毒包装、腺相关病毒包装服务以及CRISPR基因编辑服务。详情可登陆舒桐生物科技官网查询或联系客服。如需了解更多信息,欢迎随时联系我们,我们将竭诚为您服务!
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