3. 细胞健康需要多久评估一次，哪些特殊情况需要评估？
Bischoff：一般来说，在传代细胞之前需要测定细胞的浓度和活力。当培养物老化时，监控细胞健康也很重要，因为细胞系的特征也在随之变化。如果细胞准备用于检测，那么最好在检测前一天和检测当天评估细胞浓度和活力。
Murphy：许多参数（比如生长、形态）很容易监控，应当定期/持续开展。在开始重要实验之前，或者其他参数显示细胞可能有问题，那么应当考虑更具体的检测，如使用活细胞/死细胞染色，或caspase的荧光抑制剂（FLICA）。具体方法要取决于细胞系，因为有些细胞更加敏感。
Patel：人们一般是在传代或接种细胞时，利用台盼蓝来评估细胞活力。这种方法虽然有用，但也只是粗略地测定某个时间点的活细胞/死细胞比例。更多的时候，研究人员想了解健康状况的时间点是无法检测的。因此，若评估已成为日常培养过程的一部分，相信会有所帮助。
至于多久评估一次细胞健康，这并没有固定的说法。当然，在重要事件发生时，比如细胞接种，建议进行评估。如果细胞是你不熟悉的类型，或者它们容易分化，如原代细胞，则更应该定期评估。活细胞分析实现了非侵入性的评估，因此应成为标准培养流程的一部分。
4. 您是否能分享一些技巧或产品，帮助大家准确高效地评估细胞健康？
Blundell：最简单的方法是使用不可固定的DNA结合染料，如PI、7-AAD或DAPI。在使用这些染料时，只需将它们添加到细胞悬液中并分析：带有完整细胞膜的细胞不会发出荧光。不过这些染料也有缺点：它们不能被固定，多色分析的空间也有限。
现在也有一些可固定的细胞活力染料，如VivaFix™ Cell Viability Assay。事实上，它们提供一系列范围广泛的激发和发射光谱，适用于大多数的仪器，为实验增添了灵活性。这些染料也适用于免疫荧光显微镜。
在使用试剂时，最好是按照说明书，使用正确的缓冲液。别忘了对照。如果你在进行多色实验，记得使用补偿对照。你可能需要阳性对照和阴性对照，来查看整个范围的细胞反应。阴性对照可选择重悬试剂的溶液。
此外，在实验中要选择合适的试剂。比如，测定凋亡的方式有很多种。如果你不确定某条通路work或你不想测定具体的通路，那么可选择通用的试剂。Caspase FLICA™ Apoptosis Detection Kit就能够检测几乎所有哺乳动物细胞中的各种caspase，它们有四种不同形式可供选择。相反，Caspase-9 FLICA Kit只适合凋亡的特定阶段。
Bischoff：MilliporeSigma提供了简便易用的分析，适合各种类型的细胞。我们的Muse细胞分析仪和Guava easyCyte仪器提供了“混合-读取”形式的分析，只需10 μL的细胞样品。Muse细胞分析仪是一个封闭的平台，有25种经过优化的分析，涵盖细胞健康的各个领域；Guava则是一个开放的系统，最多具有三个激光器，适用于单管或平板的检测。
Guthmiller：最佳方法取决于很多因素，包括你试图测定的内容、拥有的仪器、你的样品类型以及所需通量。许多商业化的分析以微孔板的形式评估细胞健康。对于简单的细胞是/否健康的实验，人们通常用四唑盐（MTT、MTS）或刃天青染料将细胞转化为读板机可检测到的彩色或荧光产物。不过，这些方法可能具有毒性，容易受到干扰。
对于珍贵的样品或关键的应用，或通量更高的实验，检测ATP的方法最为简单，因为它们的操作方案只是简单的“加样-混合-测定”，在10分钟内就能提供数据。而且，它们更加灵敏，需要的细胞量更少，适合高通量的小型化实验。
此外，也可以利用实时分析来监控细胞活力、毒性或凋亡，如RealTime-Glo™ Viability Assay或RealTime-Glo Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay，从而轻松确定细胞的最佳参数，或确定最佳的处理时间和浓度。监控培养基中营养物浓度的变化和细胞产生的代谢物，可以深入了解代谢的变化。
Murphy：ICT的Necrosis vs. Apoptosis Assay为同时检测细胞凋亡和坏死提供了一种方便的方法。此试剂盒结合了一种红色的活细胞/死细胞染料（7-AAD）和一种绿色的caspase检测试剂（FAM-FLICA）。凋亡细胞表现为FAM-FLICA阳性（绿色），坏死细胞表现为7-AAD阳性（红色），两种均为阳性的是晚期凋亡细胞。
如果你担心那些更轻微的健康状况，它们不会快速演变为细胞凋亡或坏死的状态，但又影响到实验，那么ICT的JC-1或TMRM/TMRE荧光线粒体膜电位检测试剂盒也许是比较理想的选择。
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