Q:我的结果拍出来全视野都是荧光信号(如下图),这是怎么回事呀?
A:这个成像的情况多半是过曝啦!造成过曝的原因就是仪器的曝光时间设置不合适,我们的荧光染料强度比一般的染料都要强,且不容易淬灭,一般情况下在3-5ms的曝光时长就能够有荧光信号了,最长也不会超过20ms(除非是放了很久发生淬灭的片子),您可以看一下您的显微镜/扫描仪的曝光时长,如果时间过长就会出现全片都是荧光信号的情况。如果您不是手动设置的曝光时长,是仪器自动曝光的,那出现这种情况有可能是您的阳性信号太弱了,仪器在短曝光时长没有信号,所以自动延长了曝光时长再拍,这就有可能把背景大量曝出来。您可以尝试手动进行曝光时长调整,如果缩短时长以后背景变弱但阳性信号也很弱,就需要调整抗体浓度和抗体孵育时间;如果缩短时长以后背景依旧很强,请确认染料是否孵育时间过长,我们的染料孵育最长不超过10min,甚至3-5min就已经能够孵育出信号了,时间过长就会出现全片都是信号的情况。
Q:我染出来的结果怎么有一些位置所有通道都有颜色?而且也不是阳性信号
A:这个情况是因为这个位置坏死或者没处理干净,导致这种位置可能有大量蛋白碎片或者是组织液,亦或者是血液,这些杂质都有可能吸附我们的TSA染料,染料的大量沉积,导致这些位置出现强非特异性。所以咱们在取材的时候,尽量避开坏死区域,像灌流清洁这些前处理也要做好,样本的质量决定最终染色的质量哦。(经验之谈:血细胞容易吸附短波长的染料,如果有些样本确实没办法灌流更干净了,可以考虑避开这些染料,至于具体是哪些染料,各厂家有些微区别,Absin这边主要是TSA480容易吸附血细胞,如下图)
Q:这个指标我做免疫荧光的时候效果很好的,怎么你们多色做出来信号完全不对?
左IF;右mIHC
A:首先您需要确认您的抗体是否有IHC应用哦,如果您用的是IF的抗体,跟我们这个实验就不太符合哦,我们多色的荧光染料是独立在抗体之外的,需要通过HRP的二抗去催化显色,跟IHC里面用HRP二抗催化DAB显色类似,所以需要IHC应用的抗体,免疫荧光则是把荧光素直接连接在抗体上,所以大家在一抗上面还是有些区别。另外,如果您手里的抗体厂家写了既能做IF也能做IHC,那我们多色的效果需要跟免疫组化(IHC)的效果去做对比哦,您可以染一个免疫组化看一下形态样子、背景情况,看看跟多色是否相似,如果组化背景不干净,多色也会有很高背景哦。
Absin多色试剂盒
货号产品名称规格货期
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