高通量测序DNA样本建库方法（1）：机器打断法

欲做测序，先需建库。

建库，即文库制备，是指将样本处理成可被测序仪读取的DNA片段，该片段需满足一定的长度，且在两端都连接了指定的序列（锚定序列、测序引物序列、标签序列等）。

目前市面上尚未有成熟的建库自动工作站，因此建库工作基本都靠实验室人员手工操作，建库结果取决于采用的实验方案、试剂种类、熟练程度等诸多因素影响。可以毫不夸张的说，建库工作量占了整个高通量测序实验中工作量的80%，其结果直接决定了测序下机数据的好坏。

下面笔者对三种主要的建库方法（机器打断法，转座酶法，扩增法），分别进行介绍：

机器打断法，是指利用超声波将DNA破碎值一定的长度后，再通过连接酶，在DNA两侧添加接头。

对硬件依赖性：    高    一颗星   *

采用这种策略建库必须配备超声波打断仪，目前 市面上主流产品为Covaris的S220和M220。 

配件和试剂成本： 高   一颗星 *

打断管，末端修复，连接酶等，市面上成熟的试剂盒较多。

每个样本建库试剂成本约需300元。

稳定性：     高     五颗星 *****     

准确性：  无GC偏好  五颗星*****

起始量：   要求起始量高  一颗星 *  

全长> 50kb，浓度 20-35ng/ul，体积 130ul，A260/A280=1.8-2.0

适用性：    可适用于各种类型的建库，最常用于全基因组测 序，例如细菌基因组测序。