01 血清中解冻后会出现些许沉淀
细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物
纤维蛋白:纤维蛋白是经常出现的较大的沉淀物,可以达到1-2mm,可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的。
纤维蛋白原:一些纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体)在处理过程中仍然处于溶解状态,而当经过最后的过滤分 装后,就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
磷酸钙:磷酸钙也是常见的一种沉淀物,通常会使血清出现浑浊,并且在37°C培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。
胆固醇、脂肪酸酯和一些不溶性脂蛋白质:胆固醇、脂肪酸酯以及一些不溶性脂蛋白质。它们也是血清中出现沉淀物的常见原因之一。
02 沉淀去除方法建议
通常以上这些沉淀物不会影响血清的品质,如果您希望除去这些沉淀物,可以将血清转移到无菌离心管内,以400g进行离心,离心后将上清液加入预过滤培养基直接使用即可。我们不建议您以过滤的方法除去这些絮状沉淀物,因为它们可能会阻塞您的过滤膜。
03 血清分装的小技巧
血清分装要提前准备好无菌分装瓶并在无菌环境下进行,因为血清在冷冻后体积会膨胀,所以需要在分装前预留下空间,以免造成血清膨胀导致瓶体破裂从而造成污染。
04 血清中补体对于细胞培养的影响
补体是一种血清蛋白质,存在于人和脊椎动物血清及组织液中,不耐热,可组成庞大的补体系统,可介导免疫应答和炎症反应。激活的补体参与溶解细胞过程,刺激平滑肌收缩、细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。
05 不同批次血清颜色为什么有差异?
血清中含有微量的血红蛋白,与采集血液过程中细胞的破裂数目有关。只要血红蛋白的含量在药典规定范围内,颜色的深浅和血清品质无关,不影响细胞培养。国家药典规定≤20mg/dL。
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