【荷斯坦◆技术】罗正中&张廷青：如何评估OPU/IVF胚胎质量优劣？

罗正中硕士 重庆三峡职业学院专任教师

张廷青博士

众所周知，OPU/IVF胚胎质量优劣直接与随后的移植妊娠成功率密切相关。然而，由于OPU/IVF胚胎始自活体采取卵母细胞，再经离体培养成熟+离体受精+离体发育生长等一系列人工干预环节，造成其7日龄胚胎外观大体形态与体内7日龄胚胎（传统冲卵所获胚胎）外观大体形态存在些微差异；加之两者7日龄定义相异而致发育阶段并不完全等同；所以，采用既往体内胚胎质量优劣评估标准来评估OPU/IVF胚胎质量优劣总会造成若干误差，实际操作时也有一定难度。有鉴于此，全球从事OPU/IVF工作的牛临床兽医和研究人员一直希望国际动物胚胎移植学会能就此组织专场培训和交流。2021年6月，美国牛辅助繁殖技术领域后起之秀，年轻的巴菲尔德博士通过视频交流方式，对全球从事OPU/IVF的牛临床兽医和研究人员就此做了专题讲座，我本人参加了这次讲座活动。本文即是根据该视频讲座内容整理后做重点陈述，并获得巴菲尔德博士本人首肯译成中文与国内同道们共享。

一、巴菲尔德博士何许人也？（图1）

巴菲尔德博士少女时代颜值应该不输影视明星，但却无意进军演艺界；其自幼就立志要做一名野生动物保护者。巴菲尔德博士学术简历耀眼，简述如下：

巴菲尔德博士现任美国科罗拉多州立大学兽医和生物医学学院助理教授。其于2000年从美国北卡罗来纳州立大学获得畜牧学学士学位；然后继续在新奥尔良大学与德国曼彻斯特大学合作完成了野生动物保护学博士学位。攻读博士学位期间，其研究方向是精子钾通道作为非激素男性避孕药潜在靶点。博士毕业后，巴菲尔德博士在美国科罗拉多州立大学完成了博士后。继之2011年（34岁）被聘为美国科罗拉多州立大学兽医和生物医学学院助理教授。她的研究重点是辅助繁殖技术在濒危动物的应用，目前主要应用于抢救美国濒临灭绝的野牛群。她于2013年（36岁）共同创立并指导了辅助繁殖技术专业硕士课程。此外，巴菲尔德博士还是国际动物胚胎技术学会基金主席，以及美国联邦政府无病原野牛纯血保种核心群建立和发展项目负责人。她虽然年轻，但经验丰富和技术熟练，曾多次在美国牛胚胎移植学会、加拿大牛胚胎移植学会和国际动物胚胎移植学会举行过关于“如何评估OPU/IVF胚胎质量优劣？”一系列技术培训讲座，好评如潮。其经年累月长期执着坚持在荒无人烟野牛活动区域工作的献身精神和敬业态度，深深感动了联邦政府主管官员、野生动物保护科学界泰斗和美国广大热爱动物民众，曾被多家媒体称为“超级女科技强人”和“牛胚胎移植创新技术新星”。经联系，她热情表示：非常愿意协助中国同道们提高如何评估OPU/IVF胚胎质量优劣技能。如果今后大家有疑问胚胎无把握评估，可以发照片给她协助鉴定（全部免费服务）。

图1.巴菲尔德博士

二、为何需要评估OPU/IVF胚胎质量优劣？

只有两个目的：

1.预测移植后妊娠率高低如何。

2.评估OUP/IVF技术流程系统各环节实施过程是否靠谱。

我们藉助图2和图3，以及表1来进一步阐明上述观点。

图2.体内胚胎质量优劣对移植妊娠率影响如何？

注：9021枚体内胚胎移植统计数据，由美国著名牛胚胎移植学家哈斯勒博士提供。

哈斯勒博士曾于1983年来中国指导胚胎移植工作，当时我本人是主要参与者之一。

表1.OPU/IVF胚胎质量优劣对移植妊娠率影响如何？（2020年部分统计数据）

图3. 各种因素对胚胎移植妊娠率影响如何？

三、为何需要反复长期实践才能真正熟练掌握OPU/IVF胚胎质量优劣评估技能？

我们用图4和表2来阐明：图4为一枚7日龄一级早期囊胚，但表2的评估结果却不一致，随着评估工作经验逐年积累，评估结果渐趋统一。

图4.7日龄1级早期囊胚

表2.评估者工作年限长短对OPU/IVF胚胎质量优劣评估准确率影响如何？

四、评估OPU/IVF胚胎质量优劣的依据是什么？

主要依据以下7项：

1.胚胎形状如何？

2.胚胎细胞质颜色（密度）如何？

3.细胞数量和紧密程度如何？

4.卵周间隙空间大小如何？

5.脱离胚体/退化细胞数量多少？

6.细胞质囊泡多少和大小如何？

7.对应胚胎日龄发育阶段吻合程度如何？

图5是早期囊胚解剖结构图，希望同道们能记牢解剖结构各部位名称。

图5.早期囊胚解剖结构各部位名称

五、国际通用胚胎质量优劣评分代码系统是什么？

采用双数制：前数代表胚胎发育阶段；后数代表胚胎质量评级。如：6-1=1级囊胚；3-2=2级早期桑葚胚；参照表3依次组合类推。

表3.国际通用胚胎质量优劣评分代码系统表

六、如何判断胚胎发育各阶段？

参阅图6和图7，同道们可初步识别胚胎发育各阶段形态特点，我们在后续文章还会对此做进一步细节描述。

图6.胚胎发育各阶段形态特点绘图

图7.胚胎发育各阶段形态特点实例图

七、7日龄胚胎质量优劣如何分级？

参阅图8。显然，主要依据活细胞多寡程度来决定7日龄胚胎质量优劣分级，我们在后续文章还会对此做进一步细节描述。

图8. 7日龄胚胎质量优劣如何分级？

八、为何体内7日龄胚胎定义和OPU/IVF7日龄胚胎定义存在些微差异？

这主要缘于体内冲胚7日龄胚胎定义0日和OPU/IVF7日龄胚胎定义0日不同所致，参阅图9则一目了然。

图9. 为何体内冲胚7日龄胚胎定义0日和OPU/IVF7日龄胚胎定义0日不同？

九、体内冲胚7日龄胚胎定义0日和OPU/IVF7日龄胚胎定义0日不同对两者质量优劣评级有哪些影响？

依据图9，这应该不难理解：两者定义0日的差异，自然会影响到对胚胎发育阶段的评级。7日龄胚胎发育标准定级如下：

1级胚胎：符合发育日龄；

2级胚胎：发育迟滞0.5-1日；

3级胚胎：发育迟滞1-2日；

4级胚胎：发育迟滞>2日。

具体对此两类胚胎就发育阶段而言是否吻合或正常，如何正确分级参见表4。显而易见，我们希望OUP/IVF7日龄胚胎应至少发育到早期囊胚阶段，最好发育到囊胚阶段或扩张囊胚阶段。

表4.如何依据发育阶段对两类7日龄胚胎质量优劣分级？

如果7日龄胚胎发育阶段是	体内胚胎定级	OPU/IVF胚胎定级
早期紧密桑葚胚	2	2
桑葚胚	1	2
早期囊胚	1	1或2
囊胚	1	1
扩张囊胚	1	1

十、体内胚胎和OPU/IVF胚胎的评估结果是否会完全吻合？

即使同一人来评判这两类胚胎质量优劣，评估结果也难以做到百分之百完全符合，参阅表5；这主要缘于OPU/IVF胚胎因卵母细胞在离体环境培养成熟+离体环境受精+离体环境发育生长，结果导致其形态多少相异于体内胚胎形态，但基本不影响其正常受孕功能；所以，初学者应切记注意这两类胚胎形态学方面的些微差别。

表5. 体内胚胎和OPU/IVF胚胎评估结果可否百分之百完全吻合

胚胎因素		符合率（%）
		体内胚胎（20个）	OPU/IVF胚胎（20个）
评估发育阶段	桑葚胚	85	82
	囊胚	86	74
	退化胚	100	89
评估质量优劣	1级	80	89
	2级	66	66
	3级	76	72
	4级	100	89

我们下期将通过大量实例来进一步阐述如何正确评估OPU/IVF胚胎质量优劣。

▍本文来源：荷斯坦杂志