要制作一张优质的血涂片，首先载玻片和盖玻片必须干净、干燥，表面无薄雾或者异物，并且无缺损或者刻痕。使用新的玻片通常可以制作出较好的涂片。边缘呈斜面的玻片表面更平滑，可以制备更好的涂片。
建议在使用前将玻片浸泡在酒精中，再用无棉绒的纸或布擦拭。操作时只能手持玻片的边缘或用止血钳夹持，即使手指上的一点点油脂残留在玻片上，都会影响细胞黏附，导致玻片无法使用。
血液样品应尽可能新鲜。新鲜未抗凝的血液，有利于制备出最好的血涂片，且细胞形态保持的最好。如使用EDTA抗凝血，应在采血后1h内制备血涂片，此时染色特性和细胞形态均仅发生轻度改变，随着时间推移和环境因素的影响，染色特性和细胞细节的变化会逐渐增多。所有需要保存超过1h的血液样品，都应当冷藏。除EDTA以外，用其他抗凝剂抗凝的血液所制作的涂片，细胞通常会发生变形，难以判读。
血涂片的制备-载玻片法
文章选自《兽医血液学操作技术手册 第2版》
■载玻片法
制备血涂片前，技术员应当将干净的玻片放在一个平坦的表面上，或者用左手（或非惯用手）持玻片的边缘（第二种技术比较难掌握，但在没有干净、平坦的表面时非常有用，例如对大动物野外出诊时）。这个玻片通常称为“涂片”。
将一小滴血直接由采血部位滴于玻片上，或者通过针头、棉棒或毛细管间接将血滴于玻片上。血滴应置于玻片的一端，如果有磨砂边，则磨砂面朝上，将血滴置于靠近磨砂面的边缘。血滴的大小直接影响血涂片的厚度，这要通过经验来摸索。
将血液滴于玻片上之后，持另一个玻片（称为“推片”，其必须干净、边缘平滑）的边缘或者磨砂边缘，置于载玻片血滴前方，朝向血滴与载玻片呈30°角。根据技术员的喜好与经验，推片可以纵向（a）或横向（b）或放置。
之后将推片后移，轻轻接触血滴，这时血液会沿两块玻片的接触面扩散（如下图）。
将血液置于玻片上后（a），将推片拉回到血滴处，使血液沿着推片边缘向两侧扩散（b），然后推片向着涂片的另一个方向滑动（c）
当血扩散到玻片截面3/4时，迅速向玻片空白面推片，推片边缘的血液将沿着推片延伸开来。推片的边缘必须平放在载玻片的表面，轻度加压保证与表面持续接触即可：通过玻片的重量和血液的表面张力形成涂片。过小的压力会使得推片离开涂片，并使血涂片中断；过大的压力会在涂片表面形成厚薄不均的波浪状。
理想的涂片，血液与侧缘间距2 ~3mm，并且随着推片到涂片的末端，形成羽状薄层。这样可以提供一个较大的适宜观察的区域，细胞没有重叠，并且有正常的形态和分布（单细胞层）。
影响涂片形状、厚度及长度（即可读区域）的因素包括：（1）血滴的大小；（2）推片放置的角度；（3）推片时的速度。
过大的血滴会使得涂片过厚、干燥缓慢，从而导致细胞变形，可读区域减少；还可能使血液顺着推片超过涂片的边缘，以至于血涂片无法使用。过薄的涂片，细胞分布过广以至于难以计数足够数量的细胞。
同样，改变推片的角度、过快或过慢的推片，会改变其后方携带的血液。如果技术员因同样的问题（过厚、过短等）而持续推出不合格涂片，则应注意上述三个因素中的一个或多个。
每个人可以根据自己的情况稍微做些改变会得到更好的效果，但是这些技巧只能通过经验积累。涂片应当迅速干燥，以避免渗透压逐渐改变，导致细胞变形。可以轻轻地在空中挥动玻片加速干燥。技术员应当避免向涂片吹气，或者将涂片放置于散热器或者其他类型的蒸汽旁，防止蒸汽聚集在涂片表面。
译者：张海霞 夏兆飞
张海霞，中国农业大学动物医学院在读博士。曾任中国农业大学动物医院住院部主管和内科主治医生。在国内核心期刊发表多篇文章，参与翻译和校对《小动物内科学》《兽医临床实验室检验手册》等外文专业书籍，参与编写《兽医临床病理学》等多部教材。北京市宠物医师大会讲师和北京执业兽医继续教育讲师。曾到韩国、欧洲多国参观学习。主要兴趣方向：犬猫内科学、血液学和内分泌学。
夏兆飞，中国农业大学动物医学院教授，博士生导师。现任中国农业大学动物医学院临床兽医系主任、教学动物医院院长，北京小动物诊疗行业协会理事长，中国饲料工业协会宠物食品专业委员会副主任委员，亚洲兽医内科协会副会长，《中国兽医杂志》副主编。长期在中国农业大学动物医学院从事教学、科研和兽医临床工作。主编/主译《兽医临床病理学》《犬猫营养需要（NRC）》《小动物内科学》和《动物医院管理流程手册》等20余部著作，在国内外发表论文近100篇。主要研究领域包括：犬猫内科疾病，宠物营养需要与食品生产，动物医院经营管理等。
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