粘蛋白定性实验—李凡他试验

李凡他试验：（Rivalta test），该检测项目由意大利医生Fabio Rivalta 发明，于 1895 年发表了该方法的详细报告，用于区分人体胸/腹腔积液中的渗出液和漏出液。此后Rivalta 检测在德国、波兰、俄罗斯和法国等国家得到广泛应用。该检测的原理是将渗出液样品加入醋酸溶液中时会形成沉淀。该检测费用低廉，可以在诊所环境中快速进行。随着检验方法的发展，该检测被其他分析方法所替代，包括胸膜积液乳酸脱氢酶 [LDH] 活性、胸水：血清 LDH 比和胸水：血清蛋白比。目前也用于宠物疾病检测，对于猫感染性腹膜炎，该检测对诊断具有较高的敏感性和特异性。

样本采集：临床一般采用超声引导下行胸腔穿刺术或腹腔穿刺术，需局麻或镇静。使用无菌技术，将 19 号或 21 号蝶形针连接到使用三通旋塞阀和10 毫升注射器组成封闭系统，收集 0.5-800 毫升的积液。取5ml左右积液置于含有 EDTA 的试管或普通血清试管中，在收集当天及时进行积液分析并行Rivalta 测试。

Rivalta 试验判读：积液逐滴加入乙酸溶液表面形成沉淀物，缓慢漂浮到反应管底部。 1秒左右观察液面上部； 3 秒左右观察液体中央部位； 7 秒左右观察液体底部。

检测方法一

实验材料：

蒸馏水、透明聚酯试管或者玻璃试管、冰乙酸

实验原理：

渗出液中含大量浆膜黏蛋白，在酸性条件下可产生白色雾状沉淀，即Rivalta试验阳性。

实验步骤：

将 7-8 mL 蒸馏水放入 10 mL 透明聚酯塑料管或者玻璃试管中。使用一次性移液管加入一滴约（20-30 μL）乙酸（98-100%），并将溶液彻底混合。使用第二根一次性移液器，将 1 滴约（20–30 μL）的样本小心地滴入乙酸溶液的顶部后观察。

实验判读：

如果沉淀形成并保持附着在表面上、保持其形状或缓慢漂浮到溶液底部，则认为 Rivalta 测试为阳性。如果渗出液滴消散且溶液保持清澈，则认为Rivalta 试验为阴性。当出现轻微混浊如云雾样，既没有形成明显的沉淀也没有完全消散时，Rivalta 测试结果为可疑。

​检测方法二

实验材料：

手套、 Rivalta 试剂、移液器、一次性试管、5～10 毫升移液器、100毫升Rivalta试剂的制备。

实验原理：

同方法一。

实验步骤：

先将 50 毫升蒸馏水倒入 100 毫升量筒中。用 5 毫升移液管加入 3 毫升冰醋酸，并用剩余的 50 毫升蒸馏水补足 100 毫升刻度备用。

将 2 ml Rivalta 试剂放入离心管或玻璃试管中；滴加 3 滴胸水/腹水观察；每次滴完后，在试管中出现云雾状沉淀即为阳性；为了便于观察，在管子后面放置于黑色背景下。

结果判读：

存在白色沉淀：Rivalta 测试阳性；没有白色沉淀物：Rivalta 测试阴性；当蛋白质高于 30 克/升时，测试结果易为阳性。

检测方法三

试剂材料：

100ml量筒、冰醋酸和蒸馏水。

实验原理：

同方法一。
实验步骤：

取100ml量筒，加蒸馏水100ml，滴入冰醋酸0.1ml，充分混匀(pH3~5)，静止数分钟，将积液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下，在黑色背景下，观察白色雾状沉淀发生及其下降速度等。
结果判读：

在滴下穿刺液后，如见浓厚白色云雾状沉淀很快地下降，而且形成较长的沉淀物，即 Rivalta试验阳性;如产生白色浑浊不明显，下沉缓慢，并较快消失者为阴性反应。
阴性:清晰不显雾状；可疑:(±)渐呈白雾状；阳性:(+)呈白雾状;(++)呈白薄云状;(+++)呈白浓云状。

三种实验添加冰醋酸量各有不同，第一种换算浓度约0.3ml/100ml，第二种方法3ml/100ml，第三种为0.1ml/100ml，均为纯冰醋酸，如果滴加稀释后冰醋酸需要换算后增加用量。

渗出液的分析还包括通过折射法测量积液的比重（SG）、总有核细胞计数（TNCC）、分类和红细胞（RBC）计数；生化分析项目：总蛋白 (TP)、甘油三酯、葡萄糖、肌酐、白蛋白和胆固醇的浓度以及LDH 和α-淀粉酶的活性等。渗出液根据 SG、TP 浓度和 TNCC 分为漏出液（SG < 1.018、TP < 25 g/L 和TNCC < 1500/μL）、改良漏出液（SG 1.018–1.025、TP 25–30 g/L、和 TNCC 1500–7000/μL），或渗出液（SG > 1.025，TP > 30 g/L 和 TNCC > 7000/μL）。具有渗出液和渗出液特征的液体（例如，TP > 30 g/L 和 TNCC < 1500/μL）也被归类为改良渗出液，从临床诊断的角度分析，富含蛋白质的漏出液又称—改良漏出液，往往是最不具有特异性的，通常是由血管静水压或毛细血管、淋巴两者的通透性增加引起的。

实验小结：

炎症肿瘤导致的是渗出液；心肝肾疾病导致的是漏出液；渗出液各项数值都是高的（大于/阳性）；漏出液各项数值是低的（小于/阴性）。