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常见的超纯水
1. 使用纯水机纯化而来;
2. 蒸馏水和离子交换水
3. 三蒸水
培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。常用的细胞培养试剂包括:超纯水,平衡盐溶液,消化液,PH调整液,谷氨酰胺溶液,抗生素溶液。
常见的超纯水
1. 使用纯水机纯化而来;
2. 蒸馏水和离子交换水
3. 三蒸水
平衡盐溶液
1、平衡盐溶液主要由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
2、D-Hank’s与Hank’s的一个主要区别在于前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。
3、配制平衡盐溶液也应当用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌.
几种常见的平衡盐溶液配方:
消化液
(1)以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶为例,称取胰蛋白酶粉末0.625g置烧杯中,先用少许D-Hanks 或PBS平衡盐溶液(pH7.2 左右)调成糊状,然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液,并不断搅拌振荡直到搅拌混匀,置室温4 小时或冰箱过夜;
(2)次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,定容至250ml,分装于盐水瓶或三角瓶,低温冰箱保存备用,胰酶常用浓度为0.25% 或0.125%。
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。
胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但超过一定限度会损伤细胞。
胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25% 。用滤器过滤除菌。
胰蛋白酶液消化时间:2-10分钟,用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。
pH调整液
常用的有HEPES液和NaHC03溶液
1.NaHC03溶液:NaHC03是培养基中必须添加的成分,一般情况下是按照说明书的要求准确添加,以保证培养基在5%CO2的环境下pH达到设计标准。
2.HEPES液:HEPES是一种弱酸,中文名称是羟乙基哌嗪乙硫磺酸。HEPES对细胞无毒性,主要作用是防止培养基pH迅速变动
100X的Hepes配制:取23.8g的HEPES溶于90ml的双蒸水中 ,用1N的NAHCO3调PH至7.8-8.0之间,过滤除菌,定容至100ml.
谷氨酰胺补充液:
谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用,合成培养基中都要添加,由于谷氨酰胺容易降解,所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。
一般配制为100倍浓缩液,配制时应加温至30℃,完全溶解后过滤除菌,分装至小瓶,储存于-20℃。
抗生素溶液:
常用的是青链霉素,俗称“双抗溶液”。
青霉素主要对革兰阳性菌有效,链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝大多数细菌的污染。
青霉素使用的终浓度为100000U/L,链霉素使用的终浓度为0.1g/L。一般配制成100倍浓缩液,可用PBS或培养基配制。
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