使用荧光纳米粒子的间接荧光抗体法

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摘   要：日本生物计量技术联盟（JMAC）联合柯尼卡美能达株式会社发布在免疫组织化学中使用荧光纳米粒子定量生物分子的性能评估要求的国际标准，适用于用荧光纳米粒子标记二抗、或通过生物素与二抗结合的链霉亲和素的间接荧光抗体法。

关键词：荧光纳米粒子、间接荧光抗体法、纳米技术、低褪色性、高灵敏度、定量分析

由日本生物计量技术联盟（JMAC）牵头，并联合柯尼卡美能达株式会社共同提出一项关于在免疫组织化学中使用荧光纳米粒子定量生物分子的性能评估要求的国际标准，其已在国际标准化组织（ISO）的“纳米技术”专业委员会（ISO/TC 229）中得到了审查，并发布为ISO/TS 23366“纳米技术——在免疫组织化学中使用荧光纳米粒子量化生物分子的性能评估要求”。

接荧光抗体法是一种使用识别特定生物分子的一抗和识别该一抗的二抗，对培养细胞或切片组织标本进行染色，进而测定特定生物分子的位置和数量的方法。

与间接荧光抗体法中通常用于可视化特定生物分子的位置和数量的荧光染料相比，纳米粒子发出明亮的荧光并且褪色非常缓慢，因此不仅适用于拍摄荧光图像，还适用于定量等分析。

特别是柯尼卡美能达开发的荧光纳米粒子PID（Phosphor Integrated Dots）具有均匀的纳米级粒径，比传统的荧光染料具有更高的亮度和更低的褪色性，可实现传统方法无法实现的高灵敏度定量分析，因此柯尼卡美能达正在将其业务发展为Quanticell服务。

此外，由于高亮度，可以从粒子中计算出亮点的数量，且可获得表明亮点数量与局部生物分子数量之间存在相关性的数据，因此柯尼卡美能达还提出了一种新的定量方法。

此次发布的标准适用于用荧光纳米粒子标记二抗、或通过生物素与二抗结合的链霉亲和素的间接荧光抗体法，定义了使用纳米粒子的间接荧光抗体法的原理、纳米粒子的选择、定量体系等基本要求。

该标准还总结了数据的可比性、性能评估方法、用于对不同系统分析的数据进行相互比较的通用参考资料，以及验证和有效性评估和报告相关的要求。由于定量系统还采用了基于亮点数量的定量方法，其成为包括柯尼卡美能达开发的PID相关技术在内的国际标准。

据称，根据此次发布的标准，NMAC有望在病理诊断等医疗和诊断领域进一步推广使用含有PID的荧光纳米粒子的免疫化学组织染色方法。

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