单细胞分选的步骤流程

　　Namocell微流控单细胞分选仪让单细胞的分选和获取更加简单快速。该款台式仪器结合了三种先进技术：流式细胞术、微流控技术、液滴分配技术，从而实现精准、轻柔、高效地分选并抓取单细胞。

　　1.流式细胞术：细胞检测方式采用流式细胞术，利用激光激发，荧光和散射光的接收来判断细胞特性，检测精度高。Pala搭载双激光，488nm为固定配置，另外可选配405nm或561nm激光器，可检测11色荧光。

　　2.微流控技术：在微流控芯片中检测分离细胞，以极低的鞘液压力（<2psi）进行分选，如手工般轻柔，保持细胞活性，零损伤。

　　3.液滴分配技术：筛选后的目的细胞包裹在鞘液液滴中，通过微流体通道将单细胞分离至96孔板或384孔板中。

　　一、应用案例：

　　单细胞测序数据

　　同一细胞系通过FACS和Namocell两种不同的设备进行单细胞分选，将分选后的单细胞用同样的方式进行裂解、扩增后测序得到以下对比结果：

　　A.RNA序列表达比较，来自Namocell的单细胞：

　　1.每个细胞检测到的平均基因数更高

　　2.比对率更高

　　3.线粒体基因读数更低

　　4.过滤后读数更高

　　B.使用Namocell分选到的细胞群与使用FACS分选到的细胞群不同

　　C.使用FACS分选的细胞应激反应基因表达上调，而使用Namocell分选的细胞并未受影响

　　单克隆生长数据

　　分别对比了多组细胞，在同样的培养基和培养条件下，使用FACS和Namocell分选得到的单细胞进行单克隆生长，结果对比差异明显。Namocell在分选细胞过程中鞘液压力低，保持细胞活性，因而细胞呈现更好的生长状态。

　　二、实验基本步骤流程：

　　在微流体通道的特定位置，有激光照射和荧光接收，检测细胞荧光信号；

　　将悬浮细胞作简单的染色（也可不染色直接分离）处理之后，用移液枪转移到芯片中；

　　在芯片中细胞样本，会随着芯片通路中的设计以单细胞流的方式通过微流体通道；

　　根据设定的荧光条件，将目的单细胞分离至孔板中（支持96孔板/384孔板）。

　　三、产品优势：

　　在单克隆细胞培养时，手动有限稀释法是经典的分离单细胞手段之一。这种方式分离单细胞，每个孔中落进去的细胞数目符合泊松分布。依靠单细胞分选(https://www.chem17.com/st387574/product_31425693.html)仪器分离单细胞的效率，无论从分选能力还是重复性都要明显优于手动的有限稀释方法。测定一款设备分选效率的标准方法，是用荧光校准微球来分选检验。

　　PCR板方法的通量没有微滴方法高，但有几大优势：

　　1、可以有选择性进行单细胞测序，提高了测序效率；

　　2、每个细胞可获取的基因数量高，通常高达1万个基因以上；

　　3、可以做RNA全长测序。微孔方法还比较新，通量高但是技术上有些受限，包括细胞间RNA的交叉污染等问题还有待解决。

　　Namocell单细胞分离仪是基于PCR板方法的，简便的获取单细胞的仪器。Namocell通过微流控芯片将所需要的单个细胞分选出来，在PCR板的小管中进行单细胞cDNA放大及合成。这不但能够对细胞样本进行特异性筛选，也能够在测序中获得更大的数据量，进而提升了测序数据的质量。

　　四、单细胞分选工作原理：

　　五、适用范围：

　　所有40微米以下尺寸的悬浮颗粒样本，包括：细胞，酵母，细菌，噬菌体等。

　　六、适用特点：

　　轻柔分选：鞘液压力小于2psi，提高分选细胞的活性；

　　轻松分选：仪器操作简单，无需专人操作维护；

　　灵活分选：样本浓度范围10~10^8cell/ml；可挑选百万分之一含量的极稀少样本；

　　无菌分选：一次性芯片，保证样本之间隔离；仪器体积小巧，可置于超净台中；

　　高效分选：96孔板分选不到1min，384孔板4min以内，单克隆率超过95%。