深圳市人民医院
姜阳阳 主管技师
不同的组织由于含水和含脂比例不同,冷冻时间和切片温度略有差异。肺是血气交换的场所,肺癌标本中常常混有血液,水分含量高,血液含量决定着肺癌组织的冷冻时间和最佳切片温度。日常工作中,可以通过组织颜色来判断血液含量,肺组织呈粉红色,说明血液较少,肺泡腔内气体较多,肺组织呈暗红色说明血液较多。粉红色的肺冻得稍慢,暗红色的肺冷冻速度较快。而暗红色的肺组织建议开启急速降温,加速冷冻,快速冷冻可以减少冰晶的产生。由于切片机内冷冻区域的温度大大低于机箱显示温度,如遇到多份冷冻标本扎堆送检的情况,建议根据个人切片速度适当冷冻标本数量,长时间低温会导致细胞核皱缩,肺癌标本的冷冻时间不宜超过5min(从OCT完全凝固开始)。
通常肺组织的最佳切片温度约-20℃(这里说的不是冷冻切片机箱体的温度,而是样品头的温度),在此温度区间,均可以制作较满意的切片。有两种特殊情况除外,干酪样坏死和错构瘤因成分特殊,切片温度建议升高至-15℃。
2、切片厚度
注:当切片出现很多空洞时,在载玻片上滴一滴OCT,轻轻平压在组织上,迅速移开载玻片,待组织上OCT重新凝固,稍精修暴露组织,再切片。
4、固定液的选择
固定的主要目的是保持组织细胞形态特征清晰和稳定,固定的好坏直接影响染色质量,冷冻制片的及时固定,充分固定由病理技师亲自掌握,因此做到及时充分固定并不难,固定液的种类也有多种,本人亲测了几种常用固定液,发现均可以用于肺癌组织冷冻固定,染色效果良好。常用的单纯固定液,如甲醇,95%乙醇;混合固定液如AF液,AAF液(由甲醛、乙醇和冰醋酸组成),乙醚酒精混合液,冰醋酸甲醇固定液等,混合固定液的固定速度更快,缺点是需要单独配制,不宜存放过久。
5、水洗和掉片
肺癌标本中通常混有血液成分,红细胞在组织冷冻时破碎,血红蛋白释放进入肺泡腔,而肺泡腔渗出液中存在许多组织细胞和泡沫细胞,经血红蛋白覆盖后,这些细胞很难与脱落的肿瘤细胞区分。根据我个人经验,充分水洗可以去除血红蛋白,至少需要流水冲洗30秒。
肺叶完整切除的标本,支气管切缘情况是病理评估的重要内容,支气管包含软骨成分,容易掉片,冷风干燥可以有效地减少富含纤维、软骨或坏死的组织冷冻切片的脱片现象,为了防止脱片,常规冷风干燥支气管切缘的冷冻制片,吹风机冷风干燥切片仅需几秒即可完成。
参考文献及书籍:
[1]杨穆荣,汪锋.影响术中冷冻诊断小体积肺腺癌准确性的临床病理因素分析[J].诊断病理学杂志,2022,29(12):1136-1139.
[2]林兴滔,葛岩,王慧玲,豆文宪,朱小兰.冷冻切片干燥处理对HE染色效果的影响[J].临床与实验病理学杂志,2017,33(04):463-464.DOI:10.13315/j.cnki.cjcep.2017.04.030.
设计:鹏飞
编辑:小约翰
联系客服