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实时荧光定量PCR应用手册
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2023.03.28 江苏

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实时荧光定量PCR与常规PCR相比,主要体现在荧光、实时与定量3个关键上。荧光是指在标准PCR体系中加入了荧光物质;实时是指通过荧光信号的积累能够实时监测每次循环后PCR产物的变化,并生成荧光扩增曲线;定量是指该技术能够实现对初始模板的定量分析。

1 核酸定量分析 对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测 ,转基因动植物基因拷贝数的检测等;

2 基因表达差异分析 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ,或特定基因在不同时间的表达差异;

3 SNP检测 检测单核苷酸多态性,对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确;

4 甲基化检测 甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症,用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ,这种方法不仅方便而且灵敏度更高;

5 产前诊断 从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受;

6 病原体检测 采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、 结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点;

7 药物疗效评估 使用qpcr对癌症或者病毒量进行定量,可以用来评估药物疗效;

8 肿瘤基因检测 癌基因的表达增加和突变,在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变,而且可以准确检测癌基因的表达量。

虽然QPCR优点众多,但是很多没有做过qpcr实验的研究者经常感到高深莫测,不知从何入手,甚至一些做过实验的研究者也会对数据处理分析感到迷茫,不知所措,这里作者帮忙整理了一些常见的原理,实验设计,常见问题等等,手把手教你从各方面了解qpcr实验。

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