3种精子优化法处理精子行宫腔内人工授精的结局分析
唐都医院妇产科(西安710038) 闵保华 罗亚宁 王晓红 杨艳红 李 丽
摘 要 目的：探讨洗涤上游法、Percoll非连续梯度离心法、Isolate密度梯度法三种方
法优化处理精液后的临床效果，以期针对不同的不孕原因和精液质量选择合适的优化精子
方法，达到较好妊娠率。方法：采用促排卵周期，用阴道B超结合尿I H峰监测卵泡发育及成
熟情况，并于优势卵泡直径达18mm，子宫内膜≥8mm，肌注人绒膜性腺激素(HCG)5000~
IO000IU 后34~36h或排卵后12h内用优化处理的精子悬液注入宫腔，黄体期给予黄体酮
20mg／d支持治疗。结果：洗涤上游法官腔内授精52周期，妊娠7例，周期妊娠率13．5 9，5；
Percoll非连续梯度离心法57周期，妊娠1O例，周期妊娠率17．5 ；Isolate密度梯度法56
周期，妊娠11例，周期妊娠率19．6 。结论：Percoll非连续梯度离心法和Isolate密度梯度
法周期妊娠率明显优于洗涤上游法
主题词授精，人工精子荻能妊娠率
精于优化法是辅助生殖技术中最为关键的环
节之一。本文对我院官腔内人工授精(IUI)治疗
的110例不孕症患者的165个周期，采用不同精
子优化法的相关因素及结果进行分析，探讨官腔
内人工授精针对不同病因和精液质量的患者选择
较为合适的精子处理方法，以取得较好妊娠率。现
报道如下。
材料与方法
1 实验对象和标本采集 收集我院2003年
4月至2004年4月行IUI治疗的110对夫妇165
个周期。男性精液质量按WHO诊断标准分类 ：
为少精子症、弱精子瘟、少弱精子症、精液液不良。
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陕西医学杂志2006年2月第35卷第2期
女性无全身性疾病及传染病，子宫输卵管碘油造 液，使两液层交界处可见清晰分界面，最上层加入
影、宫腔镜及腹腔镜检查至少一侧输卵管通畅，并 待处理精液2．Oral，离心和精子收集与洗涤上游
且双方无生殖系统急性炎症。不孕年限平均6(2 法同。Isolate密度梯度离心法：取锥形离心管，在
～ 13)年。嘱患者配偶禁欲3～7d，于授精日取精 其底层加入9O Isolate，中层加入5O Isolate，
于无菌杯内，并标明双方姓名，放无菌操作台室温 上层加入精液。处理方法同Percoll法，但均要求
(25～ 3O℃)直到精液完全液化(约30min)，按 严格无菌操作。
WHO的标准[ 进行常规检查。精子各参数分析 4 促排卵及IUI 采用人绝经期促性腺激
均符合下列范围：精液量2．O～5．0 ml，前向运动 素(HMG)的药物控制周期，系月经周期的第3日
的精子>1()×10 ／ml，活率>4O ，a+b级精子 开始应用HMG(75～225 IU／d)，当卵泡直径≥
≥25 ，正常形态精子>6O 。患者按IUI先后顺 14mm，每日早晨测尿I H 1次，并配合阴道探头
序随机编人洗涤上游法(A组)、Pereoll非连续梯 B型超声仪监测卵泡发育及子宫内膜情况。当优
度离心法(B组)、Isolate密度梯度离心法(C组)。 势卵泡直径18ram，子内膜≥ 8ram，尿LH 阳性
三组中男方年龄分别为(30．5土4．1)岁，(31．O土 时，肌注人绒毛膜促性腺激素(HCG)5000～
4．5)岁和(29．8士5．4)岁(P>0．05)，女方年龄分 1000IU，注入后的34~36h左右或排卵后12h内
别为(26．9= 3．6)岁，(27土2．1)岁和(28士1．8)岁 进行IUI。IUI时患者取膀胱截石位，用无菌生理
(P>0．05)，不孕年限分别为(6．2士2．3)年，(5．9 盐水冲洗消毒后用培养液冲洗阴道，将优化好的
士3．4)年和(6．1土3．5)年(P>0．05)。 精子悬液应用IUI管(精子密度<10×1O ／ml、0．
2 实验仪器和试剂 B超(阴式探头)，无 2ml<量<0．5m1)或用子宫通液用的双腔导管
菌操作台(上海仪器厂)，离心机(日本)，普通显微 (精子密度≥1O×10 ／ml、Iml< 量<3．5m1)，缓
镜(日本0L．YMPUS)，人输卵管液(HTF、渗透压 慢注入官腔，术时动作轻柔及避免出血。术后静卧
283mosm／kg、PH7．4)，Percoll液(9O ，45 )， 3O～60min，常规给予黄体酮20mg／d，共14d；或
Isolate精子分离液(50 、90 二氧化硅胶体液 排卵后隔时注射HCG 2000IU 共5次，药用完后
上、下层，美国Irvine，Scientific公司)，培养箱(美 来院测尿HCG(北京蓝十药业)阳性为生化妊娠，
国Nuaire)。 继续给予黄体酮支酮支持治疗，至IUI后6周B
3 精子处理方法 洗涤上游法：取液化精液 超检查见到孕囊为监床妊娠[3]。
2ml与HTF2m1混匀，400g离心20min，留管底 结果
精子团用2mlHTF混匀，300g离心lOmin，去除 1 3种优化方法处理前后精子的密度、活
上清液后，留底部沉淀精子，加1．8mlHTF，倾斜 率、活力比较 见表1。各组精子处理前后比较，
45℃置CO。培养箱孵育50min，待精子充分上游 都有显著性差异(P<O．05)，且Pereoll非连续梯
后，吸取上层含精子的悬液1．Oral于无菌试管 度离心法、Isolate密度梯度离心法处理后的回收
中。Percoll非连续梯度离心法：取1．Om1含9O 精子的密度显著高于洗涤上游法，但3组精子优
Percoll液加入锥形离心管内，然后用无菌巴斯德 化后活率及活力比较差异均无显著性意义(P>
吸管垂直沿管底缓慢加入1．0ml含45 Pereoll 0．05)。
表1 3种优化方法处理前后精子的密度、活率、活力比较( ±s)
组 别
A 组
B组
C组
精子密度(×10 ／m1) 精子活率( )
处理前 处理后 处理前 处理后
38．5土27．4 87．5土16．2。 35土16 91土1 5。
37．6士25．7 1OO．4土15．9“ 37土14 9O土13。
38．2土26．8 1O2．1土16．1“ 36土17 89士16’
精于(a+b)活力( )
处理前 处理后
27土16 78士1 5。
Z6土1 7 80士16。
27土13 8l士16‘
注：与处理前比较，*P<o．05I与A组处理后密度比较。AP<O．05IA组洗涤上游法lB组Percoll非连续梯度离心
法；C组Isolate密度梯度离心法
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15O
2 3种优化方法周期临床妊娠率比较 见
表2。A：B两组比较，差异有显著性意(P<O．05)；
而A、C两组比较，差异有显著性意义(P<O．05)。
表2 3种优化方法周期临床妊娠率比较( )
注；与A 组比较，* P<O．05
讨 论
精子优化技术与IUI结合是治疗男性少精子
症、弱精子症、精液不液化、女性宫颈因素、子宫位
置异常、免疫因素等不育的重要治疗手段之一『2]。
官腔内人工授精妊娠率随年龄的增长而下降，随
不孕年限延长而降低[3]。在一个周期内授精2次
的妊娠率显著优于一次，而授精3次并不能使妊
娠率有相应的提高口]。人工授精由于洗涤精子，除
去了其表面抗原，以及精液中多种酶及前列腺素，
授精后不产生排异反应，而官腔内人工授精避免
了不良的宫颈因素对精子游动的影响，缩短了精
子游动的距离，从而增加了受孕机会。
本文用3种方法优化精子其结果显示：① 洗
涤上游法是利用精子的游动能力，通过液体界面
进入不同的培养液达到精子优化分离的目的。本
方法操作简单、节省培养液、成本低、并无毒副作
用。但精子活力增加不明显，回收精子密度低，且
畸形精子数偏高。由于此法能洗去精浆中影响精
子活力的物质如白细胞、细菌、抗精子抗体和前列
腺素，适用于免疫性不孕和宫颈因素不孕以性功
能障碍和不明原因性不孕。②Percoll非连续梯度
离心法是一种用聚乙烯吡咯烷酮包被胶体硅形成
的介质，具有分离活动精子的作用。Percoll非连
续梯度离心法的优点是精子回收率高，尤其对少
弱精及冻精者，能回收较多的精子并明显增加其
活力。但Percoll可增加精液粘度、残留在精液中
的Percoll液在精卵结合过程中可能对精子造成
损害，以及经Percoll密度梯度离心后精子可出现
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顶体区和中段膜水肿，将影响精子受精能力L4]。由
于Percoll精子处理目前临床上存在争议，全国各
地的生殖中心现已很少使用。③Isolate精子分离
液是一种非连续液态过滤膜，为二氧化硅以共价
键形式交错连结于Heper—HTF，经特殊处理的悬
浮胶体密度梯度介质，可有效减少精液中圆细胞
的干扰，与待分离精子不发生反应，不易使顶体膜
蛋白失活L5]，使标本中占优势的能动精子及密度
与Percoll法相似，但消耗的培养液较多，花费的
成本较高，适用精液粘稠、严重少精和弱精子症。
综上所述，本文初步得出结论。洗涤上游法适
宜于正常精液者，Percoll非连续梯度离心法和
Isolate密度梯度离心法由于回收率较多的精子并
增加处理后精子的活力，除正常精液外，尤其对少
弱精子症，畸形精子症能最大限度的获得活力较
高的精子，以便提高IUI的临床妊娠率。常规洗涤
上游法精子回收率低，这与熊承茛研究相符。而回
收精子的数量与IUI成功率有很大关系[6]。
我们针对不同的不孕原因和精子质量选择合
适的优化精子方法，取得较好的临床妊娠率。官腔
人工授精操作简便，完全可靠，疗效肯定，且费用
低，易被广大不孕患者所接受，加之这种有针对性
精子优化方法，使其临床妊娠率有所提高。
参考文献
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2
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(收稿：2005—03．14