今天小编为大家解析一篇中南大学湘雅医院杨连粤教授团队在 cell death & disease 上在线发表了题为:Prog rammed cell death 10 promotes metas tasis and epithe lialmesenchymal transition of hepatoce llular carcinoma via pp2a cmediated yap activation(程序性细胞死亡10通过pp2a介导的yap激活促进肝细胞癌的转移和上皮-细胞-实质转变)的研究论文。
研究背景
肿瘤转移是肝细胞癌(HCC)患者术后肿瘤复发和死亡的主要原因,但潜在机制尚不清楚。越来越多的证据表明,程序性细胞死亡10(PDCD10)在许多生物过程中起着重要作用。
然而,PDCD10在肝细胞癌进展中的作用仍然难以捉摸。本研究旨在探讨PDCD10在肝癌中的临床意义和分子功能。PDCD10在肝细胞癌中显著上调,这也与侵袭性临床病理学特征相关,并预测肝癌患者肝切除术后预后不良。高PDCD10表达促进HCC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及肿瘤生长、体内转移。此外,PDCD10可促进HCC细胞的上皮到间充质转化(EMT)。
在机理方面,PDCD10直接与蛋白磷酸酶2A(PP2Ac)的催化亚基结合,增加其酶活性,导致YAP的相互作用和YAP蛋白的去磷酸化。这种相互作用有助于YAP核易位和转录激活。
PP2Ac是PDCD10介导的肝细胞癌进展所必需的。敲低PP2Ac消除了PDCD10在HCC的迁移,侵袭和EMT中的肿瘤促进作用。此外,PP2Ac抑制剂(LB100)可以限制高PDCD10表达的HCC的肿瘤生长和转移。
总的来说,PDCD10通过与PP2Ac相互作用来促进YAP激活,从而促进EMT和HCC的进展,这为癌症转移的机制提供了新的见解。PDCD10可能是HCC的潜在预后生物标志物和治疗靶点。
见图一
PDCD10在肝细胞癌组织中上调,与肝细胞癌患者的预后不良有关。
图一
A 比较来自 :
Oncomine(https://www.oncomine.org/),GEO(GEO入藏号:GSE10和GSE57957)和TCGA数据库的HCC组织和正常肝组织中PDCD36376 mRNA的水平。
B 通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析PDCD10在新鲜冷冻ANLTs或NLT和HCC组织中的mRNA和代表性蛋白表达。
C PDCD10在不同HCC患者亚组中的mRNA表达。
D 采用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别分析PDCD10在L02和8个HCC细胞系中的mRNA和蛋白表达。
E代表性IHC图像显示了PDCD10在ALTERT和HCC肿瘤组织中的蛋白表达,有或没有MVI。比例尺,50 μm。
F Kaplan-Meier分析了训练队列中PDCD10表达高或低的HCC患者的总生存期和无病生存期。
G Kaplan-Meier使用TCGA数据库中的公共数据分析基于PDCD10 mRNA表达的HCC患者生存概率。ANLT邻近非肿瘤性肝组织、NLT正常肝组织、T肿瘤组织、MVI微血管浸润、SHCC小肝细胞癌、SLHCC孤立性大肝细胞癌、NHCC结节性肝细胞癌。n.s.,没有意义;*P < 0.05;**P < 0.01;P < 0.001。
见图二
PDCD10促进HCC细胞迁移,体外侵袭生长,体内转移。
图二
A 增殖细胞的细胞核用EdU(红色)标记,HCC细胞的所有细胞核用Hoechst 33342(蓝色)标记。EdU阳性率表示每个HCC细胞的增殖速率。比例尺,50 μm。数据是三个独立实验的平均±SD。B-C伤口愈合
B 和Transwell
C 测定用于检测Hep3B的迁移和侵入能力氯化碳靖剂10, HepG2PDCD10和它们的对照细胞,分别。比例尺,50 μm。数据是三个独立实验的平均±SD。
D 通过体内成像系统(IVIS)监测来自指定HCC细胞的小鼠原位肿瘤,并在右栏中描绘了肿瘤生长曲线。小鼠肺的E离体生物发光图像显示,来自指示HCC细胞的荷瘤小鼠的肺转移。
F代表性小鼠肝脏和肺部H&E染色显示各组肝内和肺转移结节。比例尺,50 μm。*P < 0.05;**P < 0.01;P < 0.001。
见图三
PDCD10促进HCC细胞的EMT。
图三
A TCGA HCC数据库中PDCD10相关基因的GSEA表明,PDCD10与细胞骨架组织和EMT的调节呈正相关。
B 指示的HCC细胞的代表性细胞骨架图像。通过使用罗丹明鬼笔环肽(红色)的F-肌动蛋白染色来观察细胞骨架。比例尺,5 μm。
C E-钙粘蛋白和维门汀在Hep3B中的表达氯化碳靖剂10, HepG2PDCD10,其对照细胞通过qRT-PCR和蛋白质印迹法检测。
D 采用免疫荧光双染色法同时检测指定HCC细胞中的E-钙粘蛋白和维门汀。比例尺,5 μm。
E 具有代表性的IHC图像显示E-钙粘蛋白和vimentin在PDCD10表达高或低的ANLT和HCC组织中的表达。比例尺,50 μm。F PDCD10与E-钙粘蛋白、vimentin表达之间的相关性通过Spearman秩相关检验在训练队列和验证队列中进行分析。**P < 0.01;P < 0.001。
见图四
PDCD10促进HCC中的YAP激活。
图四
A 京都基因和基因组百科全书(KEGG)对STRING数据库中PDCD10相互作用蛋白的途径富集分析(http://string-db.org)。
B TCGA HCC数据库中PDCD10相关基因的B GSEA表明PDCD10与河马信号通路相关。
C 使用TCGA HCC数据的相关热图(相关系数)显示PDCD10与Hippo信号下游效应子之间的相关性与肿瘤增殖,迁移,侵袭和EMT相关。
D Hep3B中河马关键蛋白和代表性下游效应子的蛋白质印迹分析氯化碳靖剂10, HepG2PDCD10及其对照细胞。
E 免疫荧光用于检测指定HCC细胞中的YAP表达。比例尺,5 μm。
F 使用核细胞质分级分离对指示的 HCC 细胞中的 PDCD10 和 YAP 进行蛋白质印迹分析。用蛋白酶体抑制剂MG132(10μM处理6小时)后,通过蛋白质印迹在HCC细胞中检测到G YAP表达。H代表性的IHC图像显示了具有高或低PDCD10表达的HCC组织中YAP的表达。比例尺,50 μm。
见图五
PP2Ac是PDCD10介导的YAP激活所必需的。
图五
A 在STRING数据库(http://string-db.org)中构建了PDCD10的蛋白质-蛋白质相互作用网络。
B TCGA HCC数据库中PDCD10相关基因的B GSEA显示,PDCD10与蛋白磷酸酶2A结合和磷酸酶活性相关。C PP2Ac在Hep3B中的酶活性氯化碳靖剂10, HepG2PDCD10及其对照细胞。数据是三个独立实验的平均±SD。
D 进行免疫共沉淀测定以确定 PDCD10 和 PP2Ac 在 Hep3B 和 HepG2 中的直接结合PDCD10细胞。
E 双免疫荧光染色显示 PDCD10 和 PP2Ac 在 Hep3B 细胞中的共定位。比例尺,5 μm。
F Hep2B中PP3Ac和YAP的免疫共沉淀分析氯化碳靖剂10, HepG2PDCD10及其对照细胞。
G 双荧光素酶报告基因测定显示 PDCD10 干扰的 HCC 细胞中具有 PP2Ac 敲低或异位表达的 TEAD 转录活性。数据是三个独立实验的平均±SD。具有PP61Ac敲低或异位表达的PDCD10干扰HCC细胞中p-YAP,YAP,CTGF和CYR2的H蛋白质印迹分析。
I 进行体外去磷酸化试验,测试PDCD10对PP2Ac去磷酸化能力的影响。**P < 0.01;P < 0.001。
见图六
PP2Ac对于PDCD10介导的肝细胞癌进展至关重要。
图六
A,B 伤口愈合(A)和Transwell测定(B)显示了PP2Ac在介导PDCD10对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响中的作用。数据是三个独立实验的平均±SD。比例尺,50 μm。采用双免疫荧光染色法检测PDCD10干扰的HCC细胞中具有PP2Ac进一步过表达或敲低的
C E-钙粘蛋白和vimentin表达。比例尺,5 μm。D PDCD10干扰的HCC细胞中EMT标志物的蛋白表达与PP2Ac进一步过表达或敲低。E 小鼠原位肿瘤和离体肺的代表性生物发光图像,来源于有或没有PP2Ac抑制剂LB-100治疗的指示HCC细胞(通过腹膜内注射构建模型后2周每隔一天5.1mg / kg)。在下组中比较原位肿瘤的荧光素酶活性和肺中转移性结节的数量(n = 4)。n.s,没有意义;**P < 0.01;P < 0.001。
见图七
示意图描述了PDCD10介导的YAP激活和HCC进展的机制。
图七
在PDCD10表达低的HCC中,PP2Ac失活并与YAP分离,导致YAP过度磷酸化并被蛋白酶体降解。在PDCD10高表达的HCC中,PDCD10增强PP2Ac的酶活性,促进PP2Ac与YAP的相互作用,导致YAP去磷酸化和核易位,最终通过诱导下游基因表达促进HCC进展。LB100可以通过抑制PP2Ac活性来阻止HCC进展。
研究结论
综上所述,高PDCD10表达有助于预测HCC患者的预后。我们还证明PDCD10通过促进EMT促进HCC细胞的侵袭和转移。PDCD10可以通过与PP2Ac相互作用并增加其活性来去磷酸化和激活YAP.因此,我们的研究表明,PDCD10是一种有价值的预后生物标志物,也是HCC的潜在治疗靶点。
好了·今天的文献解读就到这儿来,我们下期再见!
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