大家好，今天小编再给大家分享一篇6+ 通路相关干湿结合的文章题目是α-Ac tinin 1 promo tes tumori genesis and epith elial-mesen chymal tran sition of gastric cancer via the AKT/GSK 3β/β-Cate nin path way（α-肌动蛋白1通过AKT/GSK3β/β-连环蛋白途径促进癌症的肿瘤发生和上皮-间质转化)从投稿到接收仅三个月，快一起来看看吧~
01
研究背景
α-肌动蛋白1（ACTN1）是一种肌动蛋白交联蛋白，与细胞分裂、细胞粘附和细胞迁移有关。此外，它还参与某些癌症（如乳腺癌）的肿瘤发生和发展。
我们探讨了ACTN1在胃癌（GC）中的功能，但目前尚不清楚。来自基因表达综合（GEO）和癌症基因组图谱（TCGA）的高通量测序和公共微阵列数据集揭示了ACTN1在预后不良的胃癌中的上调。
这些结果通过蛋白质印迹（WB）、实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和免疫组织化学进一步验证。构建了功能胃癌细胞的丧失和增加，揭示了ACTN1过表达对促进GC细胞增殖、侵袭、迁移和抑制细胞凋亡的作用。
机理研究表明，ACTN1通过AKT/GSK3β/β-连环蛋白途径调节胃癌的上皮-间充质转化（EMT）和肿瘤发生，AKT MK2206抑制剂证实了这一点。总之，这些结果表明ACTN1可能是胃癌治疗的有希望的候选药物。
见图一
ACTN1在GC中的异常表达。
图一
a 从 10 对 GC 肿瘤（肿瘤）和邻近正常肿瘤（正常）获得高通量测序结果。
b 根据GEPIA（P < 1.408 *），从TCGA数据库和GTEx获得的211个GC样本和0个非癌样品之间的ACTN05异常表达。
d GSE79973 （肿瘤 n（t） = 10;正常 n（n） = 10）， GSE118916 （肿瘤 n（t） = 15;正常 n（n） = 15）， GSE54129 （肿瘤 n（t） = 111; 正常 n（n） = 21）， GSE56807 （肿瘤 n（t） = 5; 正常 n（n） = 5）， GSE26942 （肿瘤 n（t） = 205; 正常 n（n） = 12）） 显示 ACTN1 在胃癌 （GC） 肿瘤中显着上调（P < 0.05 被视为统计学意义。
见图二
ACTN1在GC组织和细胞系水平上的异常表达。
图二
a 蛋白质印迹显示，相对于相邻的正常肿瘤（正常），1对GC肿瘤样本（肿瘤）中有8对的ACTN10上调。
b 通过RT-qPCR测定1对胃癌（GC）肿瘤（肿瘤）和邻近正常肿瘤（正常）之间ACTN19的mRNA水平。
c ACTN1的代表性免疫组织化学（放大倍数：200×; 400×;比例尺 20um）。
d-和 e.人胃上皮细胞系 （GES-1） 和 GC 细胞（HGC-1、AGS、MKN-27 和 MKN-45）之间 ACTN28 的蛋白质 （d） 和 mRNA （e） 水平 （P < 0.05 *， <0.01 **， <0.001 ***， <0.0001 ****;GAPDH作为RT-qPCR和WB的上样对照）。
见图三
ACTN1促进GC的增殖。
图三
a 通过 RT-qPCR 在 GC 细胞（空质粒作为阴性对照 [VEC]）中确认了 ACTN1 过表达质粒 [OE] 的转染效率。b RT-qPCR和WB分析表明，siRNA3的敲低效率最高（siR-NC为阴性对照[NC]）。
c siRNA3和ACTN1过表达质粒用于随后的敲低和过表达实验（siRNA3 [SH]，siR-NC [NC]，ACTN1过表达质粒[OE]，对照质粒[VEC]）。
d 通过EDU掺入检测的胃癌的增殖能力。使用GraphPad量化EDU阳性率的直方图，结果表明ACTN1的过表达促进了增殖，而其敲低则逆转了这种效应（放大倍数：100×;比例尺20um;P < 0.05 *， <0.01 **， <0.001 ***， <0.0001）。
见图四
ACTN1促进GC的侵袭，迁移并抑制细胞凋亡。
图四
a AGS和MKN-1细胞中ACTN28敲低或过表达后的细胞凋亡分析结果。
b 敲低和过表达ACTN1在胃癌（GC）中的侵袭和迁移能力（放大倍数：100×;比例尺 20um）。
c 伤口愈合试验显示，过表达ACTN1促进胃癌（GC）的迁移，而其敲低抑制GC的迁移（放大倍数：40×;比例尺 20um） （P < 0.05 *， <0.01 **， <0.001 ***， <0.0001）。
见图五
ACTN1调节胃癌中的EMT。
图五
a 通过生物信息学网站（RNA Interactomes ENCORI百科全书）进行的相关性分析表明，ACTN1与间充质标志物（CDH2，VIM，SNAI1，SNAI2，ZEB1，TWIST1，TWIST2）呈负相关，与上皮标志物（CDH1）呈负相关（P < 0.0001）。
b E-钙粘蛋白（上皮标志物）和维门汀（间充质标志物）的免疫共荧光显示，ACTN1上调明显上调维门汀，而下调E-钙粘蛋白（维门汀染成绿色;E-钙粘蛋白染成红色;细胞核染成蓝色[DAPI]）。
c WB沉默和过表达组之间的EMT相关分子（上皮标志物E-钙粘蛋白;间充质标志物Vimentin和EMT相关转录因子蜗牛）的蛋白质水平（P < 1.0 *， <05.0 **， <01.0 ***， <001.0 ****;比例尺：0001 μm）。
见图六
ACTN1促进β-连环蛋白的稳定性和核易位。
图六
a ENCORI表明ACTN1与β-连环蛋白（CTNNB1）及其下游靶基因（CD44，FN1，C-JUN，L1CAM，MMP14）呈正相关（P < 0.001）。
b 蛋白质印迹显示，ACTN1 过表达增加了总β-连环蛋白 （t-β-连环蛋白）、核β-连环蛋白 （n-β-连环蛋白）和细胞周期蛋白 D1 的蛋白水平，而抑制了 p-β-连环蛋白（在 T41 和 S45 处磷酸化）的蛋白水平。ACTN1的敲低产生了相反的效果（LaminB1作为核蛋白的加载对照）。
c 通过RT-qPCR评估ACTN1沉默组和过表达组之间细胞周期蛋白D1（CCND1）和β连环蛋白（CTNNB1）的转录水平（P < 0.05 *， <0.01 **， <0.001 ***， <0.0001 ****）。
d 免疫荧光显示，ACTN1过表达显著上调细胞质β连环蛋白水平，同时细胞核中β连环蛋白适度升高，红色箭头表示。ACTN1的敲低产生了相反的效果（比例尺：20μm）。
见图七
ACTN1通过AKT/GSK3β/β-连环蛋白途径促进胃癌的肿瘤发生和发展，并促进EMT。
图七
a ACTN1的过表达显著促进了AKT（Ser473）和GSK3β（Ser9）的磷酸化，而其敲低抑制了这种磷酸化。
b AKT抑制剂MK2206（10 mM）显着挽救了胃癌（GC）细胞中过表达的ACTN1的迁移促进作用（二甲基亚砜[DMSO]作为对照;比例尺：20 μm）。
c 蛋白质印迹显示，ACTN1上调增强p-AKT、p-GSK3β、β-连环蛋白和蜗牛表达，抑制β-连环蛋白磷酸化。AKT抑制剂MK2206（10mM）部分挽救了ACTN1的作用。
02
研究结论
综上所述，ACTN1通过AKT/GSK3β/β-连环蛋白途径参与GC的肿瘤发生和EMT，与预后不良相关，可能是GC治疗的有希望的候选者。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！
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