典君生物慢病毒/逆转录病毒感染悬浮细胞protocol
一、病毒浓缩液感染
1. 将目的细胞(如lin-细胞)按照105/ml种到6孔板中,每个孔细胞数约为2*105 个。
2. 以 4ug/ml-6ug/ml加入polybrene和病毒浓缩液(MOI=60-100)。
3. 将平板用胶条四个角粘牢固(保证离心时不外渗培养基),用保鲜膜将整个平板覆盖两层。
4. 1800 rpm ,37度离心2h。
5. 将平板从离心机取出,去掉保鲜膜和胶带,放入培养箱中37度继续孵育2-3h。
6. 取出平板,用移液器收集所有细胞到10ml离心管中(用PBS洗两次孔板,尽量把6孔板里的细胞收集完)。
7. 离心弃上清,将细胞重新新种入一个新的孔中,48h荧光显微镜或流式仪检测感染效率。
二、病毒原液感染
1. 将目的细胞(如lin-细胞)按照105/ml种到6孔板中,每个孔细胞数约为2*105 个。
2. 以 4ug/ml-6ug/ml加入polybrene和48h收集的病毒原液6ml。
3. 将平板用胶条四个角粘牢固(保证离心时不外渗培养基),用保鲜膜将整个平板覆盖两层。
4. 1800 rpm ,37度离心2h。
5. 将平板从离心机取出,去掉保鲜膜和胶带,放入培养箱中37度继续孵育2-3h。
6. 取出平板,用移液器收集所有细胞到10ml离心管中(用PBS洗两次孔板,尽量把6孔板里的细胞收集完)。
7. 离心弃上清,将细胞重新新种入一个新的孔中,48h荧光显微镜或流式仪检测感染效率。
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