悬浮细胞感染

典君生物慢病毒/逆转录病毒感染悬浮细胞protocol

一、病毒浓缩液感染

1. 将目的细胞（如lin-细胞）按照10⁵/ml种到6孔板中，每个孔细胞数约为2*10⁵ 个。

2. 以 4ug/ml-6ug/ml加入polybrene和病毒浓缩液（MOI=60-100）。

3. 将平板用胶条四个角粘牢固（保证离心时不外渗培养基），用保鲜膜将整个平板覆盖两层。

4. 1800 rpm ，37度离心2h。

5. 将平板从离心机取出，去掉保鲜膜和胶带，放入培养箱中37度继续孵育2-3h。

6. 取出平板，用移液器收集所有细胞到10ml离心管中（用PBS洗两次孔板，尽量把6孔板里的细胞收集完）。

7. 离心弃上清，将细胞重新新种入一个新的孔中，48h荧光显微镜或流式仪检测感染效率。

二、病毒原液感染

1. 将目的细胞（如lin-细胞）按照10⁵/ml种到6孔板中，每个孔细胞数约为2*10⁵ 个。

2. 以 4ug/ml-6ug/ml加入polybrene和48h收集的病毒原液6ml。

3. 将平板用胶条四个角粘牢固（保证离心时不外渗培养基），用保鲜膜将整个平板覆盖两层。

4. 1800 rpm ，37度离心2h。

5. 将平板从离心机取出，去掉保鲜膜和胶带，放入培养箱中37度继续孵育2-3h。

6. 取出平板，用移液器收集所有细胞到10ml离心管中（用PBS洗两次孔板，尽量把6孔板里的细胞收集完）。

7. 离心弃上清，将细胞重新新种入一个新的孔中，48h荧光显微镜或流式仪检测感染效率。