人血清白蛋白-FITC，关于荧光素可标记白蛋白HSA/BSA的相关方法

异硫氰酸荧光素(FrTC)为荧光免疫分析中常见的荧光探针之一,其量子产率高,有较好的光稳定性和低温度系数。在碱性条件下,FITC分子中的异硫氰基可直接与蛋白分子中的氨基(主要为赖氨酸-NH2)经碳酰化反应形成硫碳氨基键,成为荧光蛋白标记。

人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）是一种蛋白质，它含有多个氨基酸残基，其中包括赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸等，这些氨基酸残基具有氨基基团，因此可以被FITC标记。FITC可以与这些氨基基团中的氨基反应，将荧光标记引入HSA分子中。

FITC标记HSA方法：

称取FITC及 HSA,分别溶解于CBS( pH 9.60)中,搅拌,将FITC溶液缓慢滴入HSA溶液,避光反应5 h,其间用0. 1 mol·L-1碳酸钠溶液维持反应的pH在9.0~9.5之间。

 FITC- BSA标记物的制备与分离：

准确称取40 mg BSA置于比色管中 ,依次加入1.5 mL水,0.5mL碳酸盐缓冲溶液,摇匀后缓慢滴加1 mL FTIC溶液,混合均匀后置于冰箱(4℃)中反应12 h。用G25色谱柱分离游离的FTIC。收集FITC-BSA标记物并定容20 mL。该液准确稀释250倍后用于化学发光体系的条件实验。

在选定的条件下,对FITC、BSA和 FITC-BSA标记物进行了化学发光实验。

结果表明:FIIC能被氧化而发光,但发光能力不强;BSA未观察到氧化发光现象;FICTBSA标记物却具有很强的氧化发光能力。向含有标记物的试液中注射NaCO溶液3 s后即有光响应信号,10 s时响应信号达最大值,随后迅速消失。由此可见,FITC-BSA-aOR-CIMAB化学发光体系是快速化学发光体系。

标记HSA的FITC共轭物可用于可视化和分析HSA在细胞或组织中的位置和分布，以及用于研究HSA与其他分子的相互作用。

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