哈喽！大家好！欢迎大家来到小药频道，今天我们来聊聊生殖毒性实验的相关研究
按照我国《药理毒理指导原则》的要求生殖毒性试验包括：
Ⅰ、Ⅱ类新药应进行生殖毒性试验,另外计划生育用药、保胎药、催乳药,与生殖、妊娠有关的药物也应进行生殖试验。在长期毒性或急性毒性试验中发现药物对生殖系统有影响时，在致突变试验中显示阳性结果时也应进行生殖毒性试验。
生殖毒性试验是在动物生殖过程中的不同阶段给予受试物,三段生殖试验中有很多的必然联系,试验观察也有许多的交叉,因此在分析试验结果时应综合评定,综合判断。
一、一般生殖毒性试验
(一)实验目的
检测受试物与动物接触后,对动物的性腺功能、交配能力、受孕、妊娠、子代等的影响。
(二)动物及剂量选择
至少在一种动物身上进行，一般选择大鼠,为降低费用也可选用小鼠。一般认为小鼠对致畸作用比大鼠更敏感。
还可选用家兔，家兔胎盘结构与人相似，更能反应受试物对怀胎的影响，但家兔与人的消化过程有较大差异,家兔消化过程有菌的参与,如评价抗菌或抑菌剂时，可能会由于受试物干扰了家兔的消化过程,对母体产生影响而出现假阳性结果。
另外选择家兔实验费用相对较高，所用数量少统计也较困难，家兔产仔数量也较大鼠、小鼠少，在致畸及子代的评价上可用样本数也少。
(三)剂量设计
通常来说，一般设3个剂量,另设空白对照组，受试物中含有溶剂时有时需要设溶剂对照组，以检验溶剂对动物生殖的影响，为了更确切地说明试验结果必要时可设阳性对照组。
每组雌雄各20只以上动物,雌性动物可多一些，以保障有一定的子代数量,顺利完成子代的试验。生殖毒性试验剂量的选择应兼顾到几个方面,对母体、胚胎、子代各个方面均应出现一定的毒性,但又不至于对母体、胚胎毒性过大而导致不能评价对子代的影响。
高剂量组应有一定的母体毒性反应：如体重下降、阴道流血、流产等,但要保证一定数量的动物受孕、产仔，剂量选择都应参考急性理性剂量，一般为LD50的1/2-1/3，在许多情况下这个剂是偏大的。
参考长期毒性试验和遗传毒性剂量比参考急性毒性剂量更能体现药物的特点，因为长期毒性试验和生殖毒性试验均为重复给药,能反映出药物在体内的蓄积性和药物持续对某--器官组织的影响，但是往往在开始生殖毒性试验时长期毒性试验也正在进行。
我们认为参考临床计量或拟用临床剂量更能准确反映受试物对人体的生殖毒性。或反映在多大剂量下有毒性反成，高剂量一般为临床剂量的50-100倍.低剂量为35倍。但受到药物溶解度及给药最大体积的影响,高剂量有时达不到临床剂量的50-100倍，这时可附最大给药浓度和最大药体积并加以说明。
(四)给药及给药周期
给药途径原则上应与临床一致，但针对生殖毒性的特点和给药的技术要求可进行适当调整，如临床上阴道栓剂可用直肠给药途径代替,静脉给药可用腹腔给药途径代替。
在用代替途径时应充分考虑药物代谢的特点、如药物代谢没有多少相关性,应用代替途径就不能真正反映出药物的生殖毒性,达不到试验的目的。由腹腔给药途径时应考虑药物直接由宫向胎盘渗透的可能性。
给药期应充分考虑生殖细胞发育的过程,最少应给予一个生殖细胞的发育周期,雌性动物至少两个性周期。雄性小、大鼠一般在出生后35~40天开始给药,给药后60-80天后开始交配(主要观察药物对雄性动物精子生成和精子活力的影响),雌性动物应给药两周后开始交配,并继续给药至多数器官形成，一般为妊娠后6天。
(五)试验过程
将大鼠或小鼠按雌、雄2:1或1:1的比例,每天下午4~5点以后同笼自然交配,为了提高受精的成功率，可以对雌性动物进行动情期诱导，将一只雄鼠与雌鼠同笼隔离,同笼隔离生活2天,然后再交配，以使雌鼠发情期一致。
为了增加受孕成功率,也可做阴道分泌物涂片检查,以保证雌鼠在动情期进行交配。阴栓检查,由于小鼠在交配后,精液、阴道分泌物阴道上皮细胞在阴道口遇空气变硬,形成阴栓阴栓一般在交配后12~24小时脱落,在交配后第二天清晨检查小鼠阴栓,有阴栓小鼠确定为妊娠0天。
雌性大鼠一般单笼交配,于交配配后第二天在底盘内检查阴栓因大鼠阴栓脱落快,一般已于第二天检查时脱落,未交配动物放回繁殖群,等待再次交配。妊娠动物继续给药。家兔妊娠一般依靠子宫触摸来确定，多在妊娠后十几天才能确定,但在确定之前就要分组给药。
(六)药后观察
每日观察亲代动物的生存情况包括精神、行为、活动,观察动物的可视黏膜、皮毛等,特别注意观察妊娠动物有无流产,定期称量动物的体重,称量动物的饮食,测量动物的饮水。
雄鼠于交配完成后处死，取附睾精子进行精子计数、精子活动能力检查。取一侧附睾称重后，迅速放入1ml营养液中,轻轻剪碎附睾,孵育15分钟,混匀,取少量精子悬液,滴入血细胞计数池内,在25~30℃下,镜下观察精子的活动情况按精子的活动情况分级:
精子活力良好，精子直线游动;
活动一般,精子比较活跃;
活动不良,精子运动迟缓,原地打转；
死精子，精子无活力。
在记录200个精子的活力后，将血细胞计数板加热处死精子,然后进行精子计数,并计算每10ml所含的精子数。精子形态检查,另一侧附睾放入1ml的生理盐水中,剪碎、过滤制成涂片,甲醇固定,伊红染色,镜下观察精子的形态,计数1000个精子中畸形精子数包括无定形、无钩、胖头、双尾、双头、尾折叠等。计算附睾、睾丸重量及系数,睾丸进行组织学检查,重点观察曲细精管内精子的发育过程。
雌鼠受孕率为受孕动物数除以同笼动物数;妊娠率为孕鼠数除以交配成功雌鼠数:记录死胎数、活胎数、活胎重量等。
记录仔鼠出生24小时的死活仔鼠数鼠体重性别，观察性别及外观畸形，部分鼠仔可进行胎儿形态学检查,包括内脏和骨骼检查。
(七)结果及统计
在一般生殖毒性试验中要观察的指标非常多，合理的试验设计能在该试验中得到大的药物与动物机体作用的信息，包括母体反应、交配情况、受孕情况、子代生长发育情况等对下面一些指标详细观察,并依据实际情况做出结论性意见:雌鼠给药后的反应死亡情况饮水量、食料量、体重、受孕率、妊娠率、平均着床数、着床前死亡率、着床后死亡率、平均产数等:雄鼠给药后的反应、死立情况、饮水量、食料量、体重、生育率、精子数量精子活动力、精子畸形率等:仔鼠数、活仔数死数体重性别比例外观畸形率、内脏畸形率。
对上述指标尽可能定量描述，达不到的情况下可进行文字描述，所得数据根据数据的性质、分布、样本大小选择合适的统计方法进行统计分析并得出统计学结论，对药物进行评价应是综合性结论，应参照统计学结果本实验室正常数据、剂量关系、相关指标的变化情况来进行评定。
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