分子生物学实验中，RNA的提取是非常关键的一步，决定了之后QPCR结果的质量
快跟小编一起学习一下RNA提取过程及注意事项吧！
【实验原理】
关于RNA抽提有很多方法，其中TRIzol法是最常用的。我们常说的TRIzol其实是Invitrogen公司试剂的名称，其含有苯酚(phenol)、异硫氰酸胍(Guanidium-thiocyanate)等物质。其原理是：TRIzol中的成分使细胞裂解同时核蛋白体上的蛋白变性，核酸释放
加入氯仿后离心，样品分水样层和有机层，RNA位于水样层中，收集水样层，通过异丙醇沉淀将其还原，可得到纯净RNA
【实验步骤】
1.细胞除去培养基，PBS洗两遍，加入1mlTrizol，吹打混匀至无团状物，静止5-10min使细胞充分裂解（注意带好口罩手套防止交叉污染，枪头，EP管均使用不含RNA酶的进口枪头）
2.每EP管加入0.2ml氯仿，氯仿：Trizol=1:5(加入氯仿，苯酚等有机溶剂溶于氯仿，而RNA溶于水相）
3.上下颠倒15s(约36次），冰上静止10min（此时可预冷离心机4℃）
4.4℃，12000g,离心10min
5.小心的吸取水相，一般1mlTrizol吸400-500ul,建议吸取400ul,不要吸到中间层，影响RNA的纯度。
6.每管加入异丙醇，体积与上一步吸取水相体积相同，400ul,上下颠倒15s(约36次），冰上静止10min（异丙醇能夺取核酸周围的水分，使RNA聚集而发生沉淀）
7.4℃，12000g,离心10min
8.用移液枪弃去上清
9.加入1ml 75%DEPC酒精，手弹沉淀洗匀-----4℃，12000g,离心5-10min，弃去上清，重复2-3次（此步骤可洗去残留的异丙醇）
10.弃去上清，尽量吸干，开盖晾10min
11.加15-25ulDEPC水，根据沉淀的量加入，-80℃保存
【注意事项】
因为生物体内部和外部环境中存在大量的RNase,并且RNase不易失活，高温下仍能正确的折叠恢复活性
所有实验所用的枪头、离心管等消耗品均要使用RNase-free的（一定注意！！！）
整个过程要在无RNase污染的条件下进行，通常可以在无菌操作台中进行实验，并用75%的酒精进行擦拭杀菌；
所有相关溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水 (包括75%酒精也需要用无水乙醇与DEPC水配制)；
实验过程中一定要戴手套和口罩（可以避免实验过程中不打喷嚏）
异丙醇、氯仿、乙醇等试剂使用避免多次使用的交叉污染
今天的分享就到这啦，大家一定注意防止RNA酶的污染呀！祝大家实验顺利！
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