细胞转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。
细胞转染可以依据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短分为瞬时转染和稳定转染。
一、区别及特点在于
首先瞬时转染：
1、导入的DNA没有整合到基因组中，而是保留在细胞核上
2、导入的遗传物质不传递到子代，遗传改变是暂时的
3、不需要选择性筛选
4、DNA载体和RNA都可用于瞬时转染
5、导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达
6、通常在转染后24-96小时内收获细胞
7、通常不适合使用具有诱导型启动子的载体研究
其二稳定转染：
1、导入的DNA整合到了基因组中
2、导入的遗传物质能够代代相传。遗传改变是永久的
3、需要选择性筛选出稳定转染的细胞
4、只有DNA载体可用于稳定转染，RNA本身不能稳定地导入细胞中
5、单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达
6、需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆
7、适用于使用带有诱导型启动子的载体研究
二、转染方法
细胞转染技术主要分为三大类：化学法、物理法及生物学法。
1、化学法
①磷酸钙法
原理：磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞
应用：稳定转染；瞬时转染
特点：不适用于原代细胞，操作简便但重复性差，有些细胞不适用，pH敏感
②阳离子脂质体法
原理：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞
应用：稳定转染；瞬时转染
特点：适用性广，可用于DNA和RNA片段，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大
③DEAE-右旋糖苷法
原理：带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞
应用：瞬时转染
特点：相对便捷、结果可重复，但对细胞有一定的毒副作用（微毒性），转染时需除血清
④病毒介导法
原理：通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中
应用：稳定转染
特点：可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等
⑤逆转录病毒
原理：介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组
应用：特定宿主
特点：携带基因不太大的细胞需处分裂期，需考虑安全因素
⑥腺病毒
原理：通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中
应用：瞬时转染；特定宿主
特点：可用于难转染的细胞，需考虑安全因素
⑦Biolistic颗粒传递法
原理：将DNA用显微镜重金属颗粒沉淀，再将抱被好的颗粒用弹道装置投射入洗吧，DNA在胞内逐步释放表达
应用：瞬时转染
特点：可用于人的表皮细胞、纤维原细胞、淋巴细胞系及原代细胞
⑧电穿孔法
原理：高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入
应用：瞬时转染、稳定转染、所有细胞
特点：适用性广但其细胞致死率高，DNA和细胞用量大
⑨显微注射法
原理：用显微操作将DNA直接注入靶细胞核
应用：瞬时转染、稳定转染
特点：转染细胞数量有限，多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞
三、影响细胞转染的因素
1.如果是贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。
2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。
3.有血清时的转染：
1）在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。（但其实只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。）
2）阳离子脂质体和DNA的最佳量在使用血清时会有所不同，因此在转染培养基中加入血清时需要对条件进行优化。
3）大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用OPTI_MEM培养基，一种营养丰富的无血清培养基。
4.培养基中的抗生素
抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，在理论上抗生素也进不到细胞内，但阳离子脂质体试剂一定程度上增加了细胞的通透性，使其能够进入到细胞内部。这大大降低了细胞的活性，导致转染效率降低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素。
对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是基因蛋白选择性抗生素（稳定转染最常用的抗性筛选试剂）的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血清培养基细胞的健康生长，需使用比含血清培养基更少的抗生素量。
5.设置阳性对照和阴性对照。
6.一般在转染24-48h，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
7.如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
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