三种药剂对青枯雷尔氏菌在烟草体内定殖的影响及机理研究

1、利用同源重组的原理,采用自然转化法将质粒pRCG-Pps-Lux中的发光酶基因成功地导入到青枯雷尔氏菌CQPS菌株的基因组中,得到Lux基因标记菌株CQPS-Lux。对标记菌株的菌落形态、生长曲线、致病力以及遗传稳定性等进行测定,结果表明:标记菌株CQPS-Lux在菌落形态及生长曲线、致病力等基础生物学特性上与原始菌株CQPS没有显著差异且标记菌株CQPS-Lux的LuxCDABE基因具有良好的遗传稳定性。说明标记菌株CQPS-Lux可以作为青枯雷尔氏菌定殖研究中的有效工具进行下一步研究。2、利用标记菌株CQPS-Lux对其在寄主植物烟草体内的定殖动态以及不同发病时期的分布情况进行了系统性研究,研究结果表明:青枯雷尔氏菌在烟草体内的迁移途径为根部→茎基部→茎中部→茎上部。青枯雷尔氏菌侵染到烟草体内后,在烟草根部以及下部茎定殖后再向烟草中上部茎进行侵染迁移;青枯雷尔氏菌在烟草植株不同组织中的侵染定殖动态基本一致,烟草植株组织内的青枯雷尔氏菌含量先缓慢地增加一段时间后迅速上升到1010 CFU/g的水平后开始有下降的趋势;在不同的发病阶段,烟草植株根部组织的含菌量均最大,烟草植株上部茎组织的含菌量均最小。烟草茎部组织的不同部位含菌量变化较大,在发病初期,含菌量从大到小依次为下部茎、中部茎、上部茎,随着病情的发展,到发病中后期,中部茎的含菌量在发病的后期超过下部茎的含菌量。3、分别研究了农用链霉素、中生菌素、噻菌铜等三种药剂对青枯雷尔氏菌在烟草体内定殖的影响,并对这几种药剂对青枯雷尔氏菌的运动性和生物膜形成以及对青枯雷尔氏菌相关基因表达的影响进行了研究,结果表明:农用链霉素、中生菌素、噻菌铜等三种药剂处理在接菌1 d、3 d、5 d后均能不同程度的减少青枯雷尔氏菌在烟草植株根部定殖量,农用链霉素和中生菌素对定殖量影响较大,与对照相比农用链霉素在处理后1d、3 d、5 d定殖量分别降低了76.38%、97.66%、89.98%、中生菌素在处理后1d、3 d、5 d定殖量分别降低了78.29%、98.33%、93.56,噻菌铜对定殖量影响较小,在处理后1d、3 d、5 d定殖量分别降低了54.86%、36.15%、84.96%;农用链霉素、中生菌素对青枯雷尔氏菌生物膜的形成有显著的抑制作用,噻菌铜在处理48 h后能够显著抑制青枯雷尔氏菌生物膜的形成;农用链霉素、中生菌素、噻菌铜对青枯雷尔氏菌的运动性均有明显的抑制作用;农用链霉素、中生菌素、噻菌铜等三种药剂对青枯雷尔氏菌运动性相关基因MotA、MotB,鞭毛相关基因FlhC、FlhD、FlgM,趋化性相关基因CheA、CheW等基因的表达均有显著的抑制作用。4、评价农用链霉素、中生菌素、噻菌铜三种药剂不同施药方式对烟草青枯病的防治效果,结果表明:农用链霉素、中生菌素、噻菌铜三种药剂不同施药方式处理对烟草青枯病发病均有不同程度的防治效果;不同的药剂对烟草青枯病的防治效果不同,每种药剂的最佳施药方式是不一样的;其中中生菌素穴施对烟草青枯病的防治效果最好,在移栽后7d、14d、22d时防效分别达到了93.51%、45.94%、41.67%,农用链霉素穴施防效次之、在移栽后7d、14d、22d时防效分别达到了75.57%、37.12%、37.50%,农用链霉素灌根、农用链霉素蘸根、噻菌铜穴施处理对烟草青枯病的防治效果最差,噻菌铜灌根处理在烟草青枯病发病早期有较好的防治效果,移栽后7 d的防治效果达到72.25%。 ...