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实验五、子囊菌亚门真菌及所致病害
 子囊菌是一类高等真菌。菌丝休一般都很发达,有隔膜,有分枝,有的菌丝体可以形减菌核、子座等机构。子囊苗的共同特点是有性生殖产生子囊和子囊孢子。子囊菌亚门是根据子囊果的有无、子囊果的形态特征,于囊着生位置,子囊孢子的特征进行分类的。子囊菌所致的病害很多,其中代表性的病害有核果类缩叶病、各种植物的白粉病、甘薯黑斑病,小麦赤霉病,苹果腐烂病、苹果黑星病和油菜菌核病等。
1.目的要求 认识子囊苗亚门各个纲病原菌的形态特征,掌握子囊菌各主要属的分类依据及所致主要病害的症状。
2.材料和用具 有关于囊菌所致病害标本,纯培养物及永久玻片标本。显微镜,擦镜纸、小块纱布、装有浮载剂的滴瓶,挑针,刀片、小垫板、载玻片,盖玻片等。有关病害的标本、挂图,幻灯片。
3.内容与方法
3.1 半子囊菌纲 属低等于囊菌,子囊不是由产囊细胞发育而来,而是由双核菌丝上的双核细胞发育形成的。子囊裸生,无子囊果。子囊壁薄,没有孔口,靠壁的胀裂或消解来释放子囊孢子。
观察材料:外囊菌属(Tapharina),取桃缩叶病(T.deformans)或李袋果病(T.prnui)材料做临时玻片,在显微镜下检查。可看见子囊在寄主叶片的角质层下排列成栅栏状,形成无包被的子囊层,子囊下有足胞。注童子囊、足胞形状。于囊圆筒形,上宽下狭,顶端平钝、无色。子囊下的空胞称为足胞。子囊孢于单胞无色,近球形或椭圆形。
观察桃缩叶病害标本,注意受害叶片形态颜色有何变化?叶片正,背面有无霉层?该霉层是由什么构成的?
3.2 不整囊菌纲 子囊果是没有孔口的闭囊壳,于囊由产囊丝形成,一般椭圆形,其中多半有8个圆形子囊孢子。于囊壁薄,早期消解,所以成熟的闭囊壳内只能看到分散的子囊孢子。
不整囊菌纲只有一个散囊菌目(Eurotiales),又称曲霉目(Asperginales),本目真菌大多数在土壤、粪便及动植物残体上营腐生生活,少数寄生在植物上,引起果实腐烂和根腐。无性阶段经常发生,其中包括许多有重要经济价值的真菌,如青霉菌(Penicilum)和曲霉菌(Aspergillus)。
观察示范镜下散囊菌属(Eurotium)的闭囊壳、子囊或散在闭囊壳内的子囊孢子。闭囊壳壁薄,只有2—3层细胞构成。子囊孢子单胞,近圆形、先色。
3.3 核菌纲 核菌纲真菌的子囊果是子囊壳,在于囊果的顶部有固定的孔口。子囊单层壁,有的子囊间有侧丝。生活史中有发达的无性阶段。白粉菌目(Erysiphalcs)和小煤炱目(Meliolales)的子囊果是闭囊壳,没有孔口,这与不整囊菌纲的子囊果相似,但是白粉苗的子囊壁不消解,在成熟的闭囊壳内能清楚地看见子囊和子囊孢子。现在国内外真菌分类学家更加重视子囊类型和子囊果核心组织,子囊果壁内的全部构造的特点,将子囊果的类型放在第二位考虑,所以将白粉菌、小煤炱菌归入核菌纲。
3.3.1 白粉菌目(Erysiphales) 本目是专性寄生菌。菌丝蔓延于寄主体表,并产
生白色粉状物,引起植物白粉病。有性阶段产生闭囊壳, 闭囊壳外有附属丝,附属丝形状不一。闭囊壳内子囊数目也不一样, 由一个至多个。附属 丝的形状和子囊数目的多少是分属的依据。
白粉菌可以引起多种植物发生白粉病,病害症状主要是表现在叶片上,开始叫病叶出现褪绿或黄色斑,接着在变色部分叶面出现白色或灰白色的粉状物, 即是白粉菌的无性繁范形成的分生孢子。当农作物接近成熟,植株老化或一年生杂草将枯死前,病叶表面在原来长有白粉的地方逐渐形成许多黑色小颗粒,这就是白粉菌的闭囊壳。
取下列病害材料,挑取闭囊壳作临时玻片,在显微镜下检查,注意子囊果有无孔口。轻轻挤压盖玻片,使闭囊壳破裂,观察子囊果内是单子囊还是多子囊,子囊果表面生有附属丝,形状如何?用下列材料按检索表进行属的鉴定。
麦类白粉病菌(Eryxiphe graminis)、瓜白粉病菌(Sphaeroiheca fuliginea)、桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla),桑里白粉病菌(Phllactinia corylea)、葡萄白粉病苗(Uncinula necator)、朴树白粉病菌(Uncinulopsis shiraiana),洋槐白粉病菌(Microsphaera Sp.)。
3.3.2 球壳菌目(Sphaeriales) 了囊果是子囊壳, 子囊壳具有真正壳壁,单生或丛生于子座上。壳壁(包被)有鲜色肉质或暗色膜质或炭质的。子囊一般排列成子实民少数是分散的。一般都有发达的无性阶段。有性阶段(球壳菌)大都是腐生的,也有一些寄生的, 引起植物重要病害。
(1)长喙壳属 (Ceratocystis);甘薯黑斑病菌(C.fimbriata)培养平板上的灰白色物是:分生孢子,有节状的和椭圆形的薄壁孢子或厚壁的分生孢子。病菌灰白色物中间还长有深褐色或黑色毛刺状小点,这是病菌的子囊果,在显微镜下可见到深色球形的子囊壳,有长颈,开口处有须状物,称口须。轻压盖玻片将子囊壳压破,成熟的子囊孢子头盔状。子囊壁早期胶化消解。
观察甘薯黑斑病病害标本,注意块根受害之后病班颜色和形状,病斑是否下陷,有无苦味?
(2)赤霉属(Gibberella):玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)是小麦赤霉病的病原菌。取培养在麦粒上的子囊壳,制成临时玻片镜检,在显微镜下观察其子座,子囊壳的形状、颜色、质地如何? 子囊、子囊孢子的形态?如何排列?
小麦赤霉病菌无性阶段为镰抱菌属(Fusarium),禾本科镰孢菌(Fusarium graminearum)产生镰刀形、无色、多细胞的大型分生孢子,也有单细胞、无色、近圆形的小型分生孢子。
观察小麦赤霉病病害标本,注意病穗上的红霉、玉米秆或稻根上的黑色或深蓝色颗粒是病菌的什么组织?
(3)黑腐皮壳属(Valsa):取苹果树腐烂病菌(Valsa mali)切片镜检,注意子囊壳的形态和着生位置,子囊及子囊孢子的形态如何?如何排列?再观察苹果树腐烂病病害标本,有什么症状特点?病斑上所生黑色小点即病菌子座,寸:座内生分生孢子器,在示范镜下观察子座内的分生孢子器和分生孢子。其无性阶段为壳囊孢属(Cytospora),分生孢子器有几个腔室,各室相通,有一个共同的孔口;内壁密生分生孢子梗,无色透明。分生孢子梗顶端生分生孢子,单胞无色,腊肠形。
(4)顶囊壳属(Gaeumannomyces):取小麦全蚀病菌(G.gramiznis)切片.置显微镜下观察子囊壳形态,子囊,子囊孢子的形态T如何排列观察小麦全蚀病害标本,注意病株基部根系生长不良,茎基部叶鞘枯腐,叶鞘内有黑色小颗粒状物,即病菌的子囊壳。
(5)麦角菌属(Clayceph):取黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)切片,置显微镜下观察,头状子座内壁周围有瓶状子囊壳,子囊壳开口向外。子囊壳内有子囊和子囊孢子。子囊细长,子囊孢子线形,单细胞,无色。无性阶段为蜜孢霉属,麦角蜜孢霉菌(Sphacelia segetum)寄生于黑麦、大麦,小麦等禾本科植物的花器,引起麦角病,病穗上先分泌含有大量分生孢子的蜜汁,以后严生黑色坚硬的菌核,就是麦角。
3.4 腔菌纲(Loeuloaseomyeeles) 有性阶段形成子座性质的子囊果,称子囊腔。子囊腔由子座组织溶解形成,它没看真正的壳壁,这种腔内直接着生子囊的子座,称为于囊座。子囊座内可以包含一个或几个子囊腔,并具有孔口和拟侧丝。有的在形态上与子囊壳相似,故又称假囊壳。子囊为双层壁。子囊孢子大多数有隔膜,多细胞,很少单胞,常出现在落叶或生长季节的后期,营腐生生活。
3.4.1 多腔菌目(Myriangiales) 多腔菌属(Myriangium):取竹多腔菌(M.haraeanum)切片置显微镜下观察,可见到很发达的子囊座组织。子囊座表生,黑色,炭质,子囊不规则地分布在子囊座的上部。单腔,单子囊,子囊球形,含子囊孢子8个;子囊孢子多细胞,有纵横隔膜,为砖格状。成熟时带黄色,纺锤形、横隔处略缢缩。再观察病害标本,注意症状特点。
3.4.2 座囊菌目(Dothideales) 球腔菌属(Mycosphaerella):子囊腔黑色、球形或瓶形,有短乳头状孔口,单腔多子囊。子囊圆柱形至棍棒形,有双层壁。子囊束生,无拟侧丝。子囊孢子椭圆形,无色,双细胞。取葱叶枯菌(Mycospharella sp.)切片,置显微镜下观察子囊腔,子囊、子囊孢于的形态特征,也可用樱桃褐斑病菌(M.ceraxella),柿圆斑病菌(M.nawae)为材料.
3.4.3 格孢腔菌目(PleosporMes) 格抱瞳菌属(Pleospora);子囊腔球形或瓶形,黑色,顶部光滑而无刚毛。子囊棒形至圆柱形,平行排列,子囊之间有明显的拟侧丝。于囊内有子囊孢子8个,卵圆形或长圆形,多细胞,有纵横分隔,无色或黄褐色。
观察苜蓿轮纹病标本和病菌(Pleospora herb~rum)切片,置显微镜下观察假囊壳、子囊、子囊孢子,拟侧丝的形态特征,再取葱叶枯病标本观察病害症状。
3.5 盘菌纲(Discomycetes) 子囊果盘状或杯状,故称为子囊盘。子囊和侧丝形成一层子实层长在盘上。
3.5.1 柔膜菌目(Helohales) 核盘菌属(Sclerolinia):观察油莱菌核病菌(S.sclerotiorum),菌核球形至豆瓣形,鼠粪状,一般生子囊盘4—5个。子囊果盘状,淡红褐色。子囊圆筒形。子囊孢子椭圆形,于囊间有侧丝。取油菜菌核病菌子囊盘切片,置显微镜下观察子囊盘、子囊、子囊孢子的形态特征。也可用紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)切片进行观察。再观察病害标本,注意菌核的形态、色泽及着生位置、症状属何种类型?
4.实验时间 3-6学时。
5.作业与思考题
(1)绘外囊菌属或散囊菌属的形态图。
(2)绘白粉眉、叉丝单囊壳属、球针壳属、钩丝壳属的形态图。
(3)绘赤霉属、多腔菌属、核盘菌属形态图。
(4)子囊菌亚门各纲的主要区别是什么?
(5)白粉属和单丝壳后,叉丝壳属和叉丝单囊壳属 的主要区别是什么?
(6)子囊菌的有性生殖过程及有性生殖在生活史中的意义。
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