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细胞培养板的选择和使用问题与解决方法 - 细胞周期/增殖/凋亡检测 - 易生物

(一)培养板的清洗和消毒

培养板一般为一次性使用,尤其在接触了有毒、有害等物质后更应该处理后丢弃。但如果要反复使用则一定要进行正确的清洗和消毒,以保证细胞培养的效果。

问:只有紫外照射可以保证无菌吗?可不可以从清洗方面做点工作?

答:看你什么用途了,一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好,因为培养板表层在生产时涂有一层促进细胞贴壁的物质,在清洗后多半会失去。悬浮或是半悬浮生长的细胞还可以。

我们一般是先泡酸过夜,清洗干净,三蒸水清洗,再用无水酒精浸泡清洗,再在工作台里用无菌水过一遍,在盖上盖子在烘箱里烤干,待烤干后,打开在超净工作台里近紫外(距离紫外灯<20cm)照射半个小时以上,效果很好,没有污染过。

其实不管老板有钱没钱,我们做实验室尤其是预实验或是摸条件时,我们一般都能省就省了,留点钱还不如买点好试剂呢:)

我们一般是先清洗干净,泡酸过夜,三蒸水清洗,在盖上盖子在烘箱里烤干,待烤干后,有两种选择:1、在超净台里近紫外灯(距离紫外灯<30cm)照射半个小时以上,六孔板一般半个小时,24孔板一个小时,96孔板时间更长,效果很好,没有污染过;2、到放射科照Co60,照完了尽快用。

我们这里肿瘤细胞耐性很好,所以重复利用没什么问题,如果原代培养比较娇贵的细胞最好用新板子,也不是很贵。

我们的经验是:清洗后用消毒液浸泡,泡酸过夜,自来水反复冲洗,双蒸水冲洗三遍,无尘环境晾干,用之前紫外灯照射半小时以上,效果很好。我们现在的穷同仁一直在应用。

永久了也会变黄,因此如果做mtt或比色时是不能用的,在不熟悉细胞培养的时候可以先学学细胞记数,熟练了用新的,不过肿瘤细胞可以在旧板子上长得很好哟,原代的细胞比较难养,塑料的较好。

紫外的穿透能力很弱,板子紫外照射时是否将盖子翻过来一起照射那?还有,细胞瓶紫外效果如何?

板子泡酸后和瓶子一样的清洗方法清洗后,60度烤干,然后放在工作台里(打开盖子)用紫外线照射半小时以上,最好一小时或两小时,盖子同时反过来照。瓶子照射没有效果,要用其他方法

同意楼上大家的意见。96孔和24孔板子在做完了后要先泡清洗计,在用棉花搽洗每个孔,这样有些贴壁细胞才不会有细胞碎片的残留,在做mtt是很重要,要不很不准的。后面就是冲洗,泡酸,3蒸水洗,紫外照射30-60分钟,不要时间太长,这样板子容易变色!但是如果是做MTT还是建议用新板子!旧板子做,结果不准!

泡酸时不要用刚配好的浓酸,因为那样会把培养板表面促进细胞贴附的一层膜腐蚀掉,细胞就无法贴壁了。用酸泡完后用自来水清洗,再用蒸馏水清洗3-5 次,然后泡在75%的酒精里(酒精用纯的无水乙醇),用前在紫外线下照射1h。基本可保证95%以上无菌,用这些板做做预实验是没问题的。

1.钴60照射适合大量的板同时灭菌,最好攒一箱,再送去灭菌。

2.紫外消毒适合少量的培养皿或培养板,比如培养板,将盖打开,翻过来,连同板一起在紫外下照射2小时即可,事先不用酒精泡。

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