ELISA包被时我们通常使用PH9.6的缓冲液的原因是什么呀，为什么不用中性或酸性的包被液呢。

包被缓冲液的选择要依靠你所包被的物质而定,没有绝对的选择,但有一个原则就是要尽可能的保持包被物的活性不被损失.目前常用的包被缓冲液有PBS,CBS,tris盐缓冲液,咪脞缓冲液等,一般来说,缓冲液的pH要大于蛋白质的pI,以保持其活性.

碱性包被液如碳缓用的较多，尤其是在小分子和载体蛋白的偶联物的包被，其主要的优势在于碱性环境可以使蛋白更容易的与板子结合。
也有用PBS和柠檬酸缓的，但是比较少见，
碳缓效果很好，又易于配置，所以CC用的最多啊！

为什么缓冲液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的带电荷情况有没有关系，

g324 wrote:
为什么缓冲液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的带电荷情况有没有关系，

蛋白和聚苯乙烯板子结合的详细过程目前上不是很明了，目前认为是通过静电吸附在板子上的，而聚苯乙烯板子一般在出厂前也要经过强电厂处理以提高吸附能力！肯定和蛋白的带电情况有关，包被缓冲液并不一定都是PH9.6 的CB，不同的蛋白选用不同的包被缓冲液可以得最佳的包被效果，从上面可以看出和蛋白的带电情况有明显的相关性！

为什么缓冲液的PH要大于包被蛋白的PI，原因有两点：
一是因为蛋白质与酶标板的结合主要是靠疏水作用的物理吸附。而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI，有利于蛋白质疏水键的适当暴露。二是因为酶标板聚苯乙烯表面暴露的主要是C－H键，而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI，可以使蛋白质带上负电荷，有利于蛋白质与酶标板的牢固结合，提高包被效率。所以我们常用的包被液体多位PH9.6的碳酸氢钠缓冲液，当然对PI低的蛋白质也有使用PH7.4的包被液的情况。
（蛋白质等电点的英文缩写是PI。 　　蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当PI=PH时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为0，此时的该溶液的是PH值是该蛋白质的PI值。某一蛋白质的PI大小是特定的,与该蛋白质结构有关，而与环境PH无关。　　在某一PH溶液中当PH＞PI时该蛋白质带负电荷。反之PH＜PI时该蛋白质带正电荷。PH=PI时该蛋白质不带电荷　　人体内PH=7.4；而体内大部分蛋白质的 PI＜6； 所以人体内大部分蛋白质带负电荷）