ELISA

1. 聚苯乙烯微量细胞培养板(平板, 40, 96孔)。
2. 酶联免疫检测仪

3. 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀释度1:1000。
4. 包被液:：0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液,4℃，保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至100 ml。

 5. 稀释液：0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, ４℃，保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween—20，0.5ml. 蒸馏水加至1000ml。

 6. 洗涤液：同稀释液

7. 封闭液：0.5%鸡卵清蛋白，pH7.4 PBS。

8. 邻苯二胺溶液(底物)：临用前配制 0.1M 柠檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O (7.163g/100ml) 6.4ml, 蒸馏水12.5ml, 邻苯二胺10mg, 溶解后, 临用前加30%H2O2 40 微升。

9. 终止液：2mol/LH2SO4。

二、主要的操作步骤

1. 包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃温育1小时后，4℃冰箱放置16～18小时。

2. 洗涤：倒尽板孔中液体，加满洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。

3. 加封闭液200微升，37℃放置一小时。

4. 洗涤同2。

 5. 加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释,，每孔200微升。同时作稀释液对照。37℃放置2小时。

 6. 洗涤同2。

 7. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小时

8. 洗涤同2。

 9. 加底物：邻苯二胺溶液加200ml，室温暗处10--15分钟。

 10. 加终止液：每孔50微升。

11. 观察结果：用酶联免疫检测仪记录490nm读数